Resumo: Streptococcus sanguinis é uma espécie pioneira comensal das superfícies dos dentes, que também está envolvida na endocardite infecciosa. Sua alta prevalência na cavidade oral indica capacidade de adaptar-se e sobreviver a diversos fatores de defesa presentes nesse nicho. Para se adaptar ao ambiente e a fatores do hospedeiro, as bactérias utilizam-se de sistemas reguladores de transcrição de dois componentes (SDC), que modulam a regulação de genes em respostas a diferentes estímulos. Neste estudo avaliou-se o papel do SDC VicRK e CovR, na susceptibilidade de S. sanguinis a opsonização pelo sistema complemento. Para isso, foram analisados os níveis de deposição de C3b / iC3b na presença de soro em um total de sete cepas clínicas de S. sanguinis, e as frequências de fagocitose por polimorfonucleares (PMNs) do sangue humano foram comparados entre as cepas S. sanguinis SK36 e mutantes knockout de vicK (SKvic) e covR (SKcov), genes estes que codificam componentes VicK e CovR, respectivamente. A cepa de S. mutans U159 foi utilizada como referência. Resumidamente, as cepas foram incubadas com soro humano a 2 ou 20% por 30 min (37 ° C, 10% de CO2), lavadas, e a presença de C3b associada à superfície foi detectado utilizando anticorpos anti-C3b humano (conjugado com FITC), sendo quantificadas por citometria de fluxo. Para avaliar as frequências de fagocitose por PMNs, as cepas foram incubadas com sangue humano durante tempos de 5, 15, 30 e 60 min (37 ° C, 10% de CO2), fixadas e coradas com Giemsa. PMNs com bactérias intracelulares, foram contados utilizando um microscópio de luz (1000 x) e os resultados expressos em relação a análise de um total de 200 PMNs. Resultados: As percentagens de deposição de C3b em SKvic, SKcov e SK36 foram de 11,3 (± 2,61), 40,2 (± 1,46) e 37,9% (± 3,97), respectivamente. Percentagem de superfície C3b foi significativamente menor em cepas de S. sanguinis em comparação a cepa de S.mutans (Kruskal Wallis, p <0,05), e em SKvic em comparação a cepa SK36 (Kruskal Wallis, p <0,05). As frequências médias de fagocitose por PMNs não foram afetadas, e foram 88, 99,3 e 99% em SKvic, SKcov e SK36, respectivamente. Conclusão: a inativação do VicK, mas não de CovR, reduz a deposição de C3b em S. sanguinis SK36. Cepas de S. sanguinis também são menos suscetíveis a deposição de C3b em comparação a S. mutans Ver menos

Abstract: Streptococcus sanguinis is a commensal pioneer species of the tooth surfaces, which is also involved in infectious endocarditis. Its high prevalence in the oral cavity indicates ability to survive to several host defense factors present in the oral niches. To sense and respond to environmental and host factors, bacteria apply regulatory two-component systems (TCSs), which modulate gene transcription in response to different stimuli. This study evaluated the role of TCS VicRK and CovR in S. sanguinis susceptibility to opsonization by the complement system. To this aim, a total of seven S. sanguinis strains were analyzed, and levels of deposition of C3b/iC3b on the present of serum, and the frequencies of phagocytosis by polymorphonuclear (PMNs) in human blood were compared between parent S. sanguinis strain SK36 and knockout mutants of vicK (SKvic) and covR (SKcov) (genes encoding VicK and CovR components, respectively). S. mutans strain U159 was used as reference. Briefly, strains were incubated with 2 or 20% of human serum during 30 min (37°C, 10%CO2), washed, and the presence of surface-associated C3b was detected using anti-human C3b antibodies (FITC conjugated), which were quantified by flow cytometry. To assess the frequencies of phagocytosis by PMN, strains were incubated with human blood during 5, 15, 30 and 60 min (37°C, 10% CO2), fixed and stained with Giemsa. PMN with intracellular bacteria were counted using a light microscope (1000 x) and expressed in relation to a total of 200 PMN analyzed. Results: The percentages of C3b deposition on SKvic, SKcov and SK36 were 11.3 (± 2.61), 40.2 (± 1.46) and 37.9% (± 3.97), respectively. Percentage of surface C3b was significantly lower in S. sanguinis strains compared to S. mutans (Kruskal Wallis, p < 0.05), and in SKvic compared to SK36 (Kruskal Wallis, p < 0.05). The mean frequencies of phagocytosis by PMN was not affected, and were 88, 99.3 and 99% in SKvic, SKcov and SK36, respectively. Conclusion: the inactivation of the vicK, but not of covR, reduces the deposition of C3b in S. sanguinis SK36. S. sanguinis strains are also less susceptible to C3b deposition compared to S. mutans Ver menos