Resumo: As proteínas Rvb1 e Rvb2 são DNA helicases dependentes de ATP pertencentes à família AAA+ ATPases (ATPases associadas com diversos processos celulares) que estão envolvidas na remodelação da cromatina, montagem da telomerase, mitose e biogênese de snoRNP ("small nucleolar ribonucleoprotein") e interagem com as co-chaperonas Tah1 (contém um domínio TPR associado com Hsp90) e Pih1 formando um complexo funcional, denominado R2TP. Este complexo já foi identificado em levedura e seres humanos, e desempenha um papel essencial na montagem de complexos multi-proteicos com DNA e RNA. Nosso grupo de pesquisa tem por objetivo identificar e caracterizar o complexo R2TP em Leishmania major pela importância deste parasita para medicina. Apresentamos o estudo das proteínas Rvb1 e Rvb2 de L. major. Os genes foram clonados e as proteínas recombinantes foram purificadas e caracterizadas quanto à conformação pelas técnicas de dicroísmo circular, gel filtração analítica e fluorescência intrínseca, mostrando que as proteínas foram purificadas enoveladas. Foram feitos ensaios funcionais de atividade ATPásica mostrando que estas possuem atividade ATPásica a qual é aumentada quando as proteínas foram incubadas com DNA. Espera-se que os resultados deste trabalho possam contribuir para o objetivo de compreensão do sistema R2TP e da regulação da homeostase do genoma de L. major. O conjunto destas pesquisas pode contribuir também para o desenvolvimento de possíveis estratégias para intervir no parasita causador de uma doença negligenciada Ver menos

Abstract: Rvb1 and Rvb2 proteins are ATP-dependent DNA helicases belonging to the AAA + ATPases family (ATPases associated with diverse cellular processes) that are involved in chromatin remodeling, telomerase assembly, mitosis and snoRNP biogenesis ("small nucleolar ribonucleoprotein") and interact with co-chaperones Tah1 (wich contains a TPR domain associated with Hsp90) and Pih1 into a functional complex, named R2TP. The R2TP complex has been identified in yeast and humans, and has an essential role in the assembly of multi-protein complexes with DNA and RNA. Due to the medical importance of Leishmania major our research group has becoming interested in the identification and characterization of the R2TP complex of this parasite. We studied the Rvb1 and Rvb2 proteins of L. major. The genes were cloned, the recombinant proteins were purified and their conformation were characterized by circular dichroism, analytical gel filtration and intrinsic fluorescence techniques, indicating that the proteins were folded. Functional assays showed that Rvb1 and Rvb2 have ATPase activity and this activity increased when incubated with DNA. Hopefully, the results of this study may contribute to the goal of understanding the R2TP system and homeostasis of the L. major genome and together, may contribute to the development of possible strategies to intervene with a parasite that causes a neglected disease Ver menos