Reatividade de auto-anticorpos antitiroidianos a peptideos de tiroglobulina obtidos por tripsinização limitada
Luis Henrique Barbosa Boechat
DISSERTAÇÃO
Português
T/UNICAMP B633r
Campinas, SP : [s.n.], 1995.
67f.
Orientador: Ricardo de Lima Zollner
Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas
Resumo: A tiroglobulina é a principal proteína sintetizada pelas células foliculares tiroidianas, representando um dos principais auto-antígenos envolvidos tanto nas doenças auto-imunes da tiróide quanto na indução de tiroidite em modelos experimentais. Vários trabalhos têm sido publicados relatando...
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Resumo: A tiroglobulina é a principal proteína sintetizada pelas células foliculares tiroidianas, representando um dos principais auto-antígenos envolvidos tanto nas doenças auto-imunes da tiróide quanto na indução de tiroidite em modelos experimentais. Vários trabalhos têm sido publicados relatando aspectos referentes à imunogenicidade da tiroglobulina humana e de outros animais, incluindo seu mapeamento epitópico e a descrição de oligopeptídeos imunogênicos sintéticos ou obtidos por tratamento enzimático. A síntese de hormônios tiroidianos envolve a recaptação da tiroglobulina presente no lúmen folicular e seu processamento por endoproteases lisosomais. Entre estas enzimas destacam-se as catepsinas B, D, H e L, cuja ação conjunta cliva o monômero de tiroglobulina em locais pré-determinados. Trabalhos recentes relatam a existência de sítios preferenciais de clivagem proteica por tripsina, demonstrando que estas áreas são correspondentes àquelas em que atuam as proteases endógenas tiroidianas. Portanto, a utilização do modelo de tripsinização limitada da tiroglobulina leva à obtençào de peptídeos análogos aos. resultantes do processamento intra-lisosomal tiroidiano. Neste trabalho realizamos a purificação de tiroglobulina porcina e humana a partir de extratos tiroidianos brutos através de cromatografia por exclusão de pesos moleculares, caracterizando eletroforética e imunologicamente tais proteínas. A tiroglobulina humana assim purificada foi submetida a tripsinização limitada com obtenção de peptídeos com pesos moleculares entre 29 kDa e >205 kDa. O reconhecimento destes peptídeos por auto-anticorpos antitiroglobulina foi estudadoatravés da técnica de immunobloting. Desta forma foi possível verificar que a freqüência de reconhecimento destes fragmentos proteicos por auto-anticorpos foi semelhante nos pacientes com doença de Basedow-Graves e tiroidite de Hashimoto, sendo estes reunidos em um único grupo referente à doença tiroidiana auto-imune. Ao compararmos os grupos com tiroidite subaguda (TSA) e doença tiroidiana auto-imune, verificamos que peptídeos de 80 kDa, 185 kDa e >205 kDa reagiram mais freqüentemente com soros provenientes de pacientes com TSA. A comparação de nossos achados com relatos da literatura sugerem que o peptídeo de 80 kDa corresponda à extremidade N-terminal da molécula de tiroglobulina humana, área pouco envolvida na gênese de auto-anticorpos em doença tiroidÜma auto-imune. Estes dados demonstram que, embora os auto-anticorpos antitiroglobulina reajam com todos os peptídeos obtidos por tripsinização limitada da Tg humana, os perfis de reconhecimento diferem entre as situações auto-imunes e não auto-imunes. O estudo destes peptídeos, sobretudo o de 80 kDa, poderá contribuir para a elucidação das relações entre endoproteases, peptídeos de tiroglobulina obtidos in vivo e resposta humoral à tiroglobulina
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Abstract: Thyroglobulin is synthesized by thyroid epithelial cells and is one of the autoantigens involved in thyroid autoimmune diseases and the main one involved in thyroiditis in animal models. Many studies related to the immunogenicity of human thyroglobulin have been published, including those...
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Abstract: Thyroglobulin is synthesized by thyroid epithelial cells and is one of the autoantigens involved in thyroid autoimmune diseases and the main one involved in thyroiditis in animal models. Many studies related to the immunogenicity of human thyroglobulin have been published, including those describing its epitopic mapping and the oligopeptides obtained by enzymatic proteolysis. Thyroid hormone synthesis involves thyroglobulin capture from follicular lumen and its processing by lysosomal proteases. Among these enzymes, cathepsins B, D, H and L have been described. The concerned action of these endoproteases leads to proteolysis in pre-determined sites. Recent papers describe the existence of preferential sites of trypsin action, demonstrating that these areas are the same involved in thyroglobulin lysis by endogenous proteases. Furthermore, the model of limited trypsinization could be used to obtain peptides analogous to those produced in vivo by thyroid proteases. In this study we have purified poreine and human thyroglobulin from thyroid erude extraets using moleeular weight exclusion ehromatography. Human thyroglobulin obtained by this method was used in limited proteolysis with trypsin, resulting in peptides ranging from 29 kDa to 2 205 kDa. The reaetion of these peptides with antithyroglobulin antibodies was analyzed by immunobloting
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Reatividade de auto-anticorpos antitiroidianos a peptideos de tiroglobulina obtidos por tripsinização limitada
Luis Henrique Barbosa Boechat
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