Orientador: Marco Aurélio Zezzi Arruda

Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Química

Resumo: Tendo em vista que a prática da transgenia reflete uma realidade mundial no setor agrícola, o principal objetivo desse trabalho de Dissertação é avaliar algumas espécies de proteínas diferenciais entre folhas de Arabidopsis thaliana não transgênica (NT) e transgênica (T), ambas irrigadas com...

Resumo: Tendo em vista que a prática da transgenia reflete uma realidade mundial no setor agrícola, o principal objetivo desse trabalho de Dissertação é avaliar algumas espécies de proteínas diferenciais entre folhas de Arabidopsis thaliana não transgênica (NT) e transgênica (T), ambas irrigadas com uma solução de Selênio (Se), frente a uma condição controle. De maneira a averiguar as diferenças entre as folhas NT e T, usando como parâmetros o efeito da transgenia e do estresse oxidativo induzido por Se, um estudo proteômico comparativo foi desenvolvido por meio da metodologia 2-D DIGE, uma variante da técnica de separação por 2-D PAGE, que oferece vantagens, tais como na detectabilidade das proteínas de baixa abundância e precisão para análise quantitativa entre as intensidades diferenciais dos spots proteicos, resultando, com efeito, um mapa proteômico mais representativo destas folhas. Quatro grupos de plantio foram combinados para análise comparativa, de tal forma que NT x T, NT x Se-NT, Se-NT x Se-T e T x Se-T. Embora não tenha sido detectadas espécies de proteínas diferencias no grupo T x Se-T, para os outros, 68 proteínas diferenciais foram detectadas, usando um fator de regulação 1,5 baseado no teste de t para p < 0,05. Dentre este total, 27 proteínas diferenciais foram precisamente identificadas por ESI-QTOF-MS/MS. Estas proteínas estão classificadas quanto às funções metabólicas, energéticas, de transdução de sinal, doenças/defensa vegetal, e algumas delas estão envolvidas nas vias da Glicólise, Fotossistema I e II, e combate à ERO (espécies reativas de oxigênio). Adicionalmente, um imageamento por ablação a laser foi feito para avaliar a distribuição de Se e Enxofre (S) em folhas dos grupos diferentes, corroborando com alguns resultados obtidos, principalmente àquelas proteínas envolvidas nas vias da Glicólise. A partir destes resultados é possível concluir que o vetor inserido também confere à planta a resistência ao estresse oxidativo, no qual o Selênio adicionado foi o efeito mais influente comparado com o efeito da transgenia

Abstract: In view of the techniques related to transgenesis show the global reality in the agricultural sector, the main goal of this Thesis work is to evaluate some differential protein species in non-transgenic (NT) and transgenic (T) Arabidopsis thaliana leaves, both they irrigated with Selenium...

Abstract: In view of the techniques related to transgenesis show the global reality in the agricultural sector, the main goal of this Thesis work is to evaluate some differential protein species in non-transgenic (NT) and transgenic (T) Arabidopsis thaliana leaves, both they irrigated with Selenium (Se) solution in front of control condition. In order to estimate the differences between NT and T leaves, using as parameters the transgenesis effect and the oxidative stress induced by Se, a comparative proteomic study was performed using 2-D DIGE methodology, a variant technique of separation by 2-D PAGE that offers ideal advantages, such as detectability of low abundance proteins and accuracy to quantitative analysis among differential intensities of protein spots, resulting in a more representative proteomic map these leaves. Four plant groups were combined to comparative analysis, so that NT x T, NT x Se-NT, Se-NT x Se-T e T x Se-T. Although there differential protein species from T x Se-T group were not detected, for the others, 68 differential protein species were detected, using regulation factor of 1.5, which was based in t test to p < 0.05. Among them, 27 differential proteins were accurately identified by ESI-QTOF-MS/MS. These proteins are classified regarding functions as metabolism, energy, signal transduction, diseases/vegetal defense and some of these were involved in the Glycolysis pathway, Photosystem I and II, and combat the ROS (reactive oxygen species). Additionally an imaging by laser ablation was done to evaluate the Se and Sulfur (S) distribution in leaves of different groups corroborating with some obtained results, mainly those proteins involved in the Glycolysis pathway. From these results, it is possible to conclude that insert vector confers resistance to the T plant regarding oxidative stress where the added Se was the effect more influential than compared with transgenesis effect