Orientador: Luciana Bolsoni Lourenço Morandini

Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia

Resumo: O gênero Dendropsophus (Anura: Hylidae) é composto por 94 espécies neotropicais, das quais somente 31 foram estudadas citogeneticamente. Embora as espécies desse gênero apresentem o mesmo número cromossômico (2n=30), diferem quanto ao número fundamental e em relação à localização de NORs....

Resumo: O gênero Dendropsophus (Anura: Hylidae) é composto por 94 espécies neotropicais, das quais somente 31 foram estudadas citogeneticamente. Embora as espécies desse gênero apresentem o mesmo número cromossômico (2n=30), diferem quanto ao número fundamental e em relação à localização de NORs. Entretanto, a escassez de marcadores citogenéticos e o alto número de espécies com cariótipos ainda não descritos impedem inferências acerca dos possíveis eventos envolvidos na diferenciação cariotípica nesse gênero. Com o intuito de fornecer novos dados para a análise evolutiva cariotípica em Dendropsophus, no presente trabalho foram descritos os cariótipos de duas espécies do grupo de D. marmoratus, D. seniculus e D. soaresi, ampliada a caracterização dos cariótipos de D. decipiens, D. meridianus e descrito o de D. werneri, três espécies do grupo de D. microcephalus. Para a localização cromossômica do gene ribossomal 5S foram utilizadas sequências isoladas de D. soaresi. Também foram utilizadas sondas para verificar a localização cromossômica de sequências teloméricas em todas as espécies estudadas. Por fim, na tentativa de gerar sondas cromossômicas para futuros estudos dos cromossomos telocêntricos encontrados em Dendropsophus, experimentos de pintura cromossômica foram conduzidos com D. nanus e D. walfordi. Dendropsophus seniculus e D. soaresi apresentaram cariótipos muito semelhantes, com a NOR localizada no braço longo dos cromossomos do par 9. Tais cariótipos se assemelham também àqueles das outras três espécies já cariotipadas do grupo de D. marmoratus (D. marmoratus, D. melanargyreus e D. nahdereri), embora o cariótipo de D. nahdereri difira dos demais por apresentar a NOR no braço curto dos cromossomos do par 1. Dois tipos de sequências de DNAr 5S foram isolados de D. soaresi. A sequência identificada como do tipo I é composta por 512 pb, dos quais 390 pb pertencem à região não-transcritora (NTS); já a sequência do tipo II apresenta NTS com apenas 249 pb. A sequência nucleotídica do DNAr 5S do tipo I é idêntica a uma sequência encontrada no hilídeo Gastrotheca riobambae. Quando utilizado como sonda, esse segmento de DNAr 5S foi mapeado no braço longo dos cromossomos do par 2 de D. seniculus e D. soaresi. Sondas compostas por sequências teloméricas detectaram exclusivamente as regiões cromossômicas terminais de D. seniculus, assim como previamente observado em D. marmoratus e D. melanargyreus. Já em D. soaresi, as sondas teloméricas também resultaram em marcações centroméricas e pericentroméricas, exceto nos pares telocêntricos identificados como 5 e 6. Dentre as três espécies do grupo D. microcephalus aqui viii analisadas, D. decipiens, D. meridianus e D. werneri, algumas diferenças puderam ser notadas. Enquanto D. meridianus e D. werneri apresentaram apenas um par de cromossomos telocêntricos de tamanho mediano, no cariótipo de D. decipiens três pares de cromossomos telocêntricos de tamanho mediano puderam ser observados. D. berthalutzae, espécie considerada do mesmo clado de D. decipiens, também apresenta cariótipo com três pares de telocêntricos de tamanho mediano. Em relação à localização da NOR, os cariótipos de D. decipiens, D. meridianus e D. werneri se assemelham, já que em todos a NOR foi localizada na região terminal do braço longo de cromossomos telocêntricos/subtelocêntricos identificados como 12. A partir de cromossomos telocêntricos microdissecados de D. nanus foi construída uma sonda capaz de identificar o par de cromossomos 15 dessa espécie. A sonda obtida, quando hibridada em cariótipos de outras linhagens de D. nanus e no cariótipo de D. walfordi, também detectou cromossomos telocêntricos de tamanho pequeno, sugerindo a homeologia entre eles. Este é o primeiro estudo que utiliza a técnica de pintura cromossômica para analisar os cromossomos telocêntricos de Dendropsophus e os resultados preliminares aqui apresentados sugerem que essa pode vir a ser uma interessante ferramenta na investigação da evolução cromossômica no gênero

Abstract: The genus Dendropsophus (Anura: Hylidae) comprises 94 neotropical species, from which only 31 were studied cytogenetically. The species of this genus have the same chromosome number (2n=30) but differ on fundamental number and NORs location. Cytogenetic markers, however, are scarce for...

Abstract: The genus Dendropsophus (Anura: Hylidae) comprises 94 neotropical species, from which only 31 were studied cytogenetically. The species of this genus have the same chromosome number (2n=30) but differ on fundamental number and NORs location. Cytogenetic markers, however, are scarce for this genus and a large number of species has not been karyotyped yet. Therefore, it is still not possible to infer about the possible events involved in the karyological divergence in this genus. In order to provide new data for evolutionary karyotype analysis in Dendropsophus, we described cytogenetically two species of D. marmoratus group, D. seniculus and D. soaresi, and one species of D. microcephalus group, D. werneri; we also detailed the karyotypes of two other species of D. microcephalus group, D. decipiens and D. meridianus. Sequences isolated from D. soaresi genome were used for chromosomal localization of the 5S rDNA gene. Probes were also used to observe the chromosomal localization of telomeric sequences in all the species in study. Finally, in an attempt to generate chromosomal probes for future studies of the telocentric chromosomes found in Dendropsophus, chromosome painting experiments were conducted with D. nanus and D. walfordi. Dendropsophus seniculus and D. soaresi had very similar karyotypes, with the NOR located on the long arm of chromosome pair 9. These karyotypes are similar to those of the other three species of D. marmoratus group already karyotyped (D. marmoratus, D. nahdereri and D. melanargyreus), although the karyotype of D. nahdereri differs from the others by presenting the NOR in the short arm of chromosome pair 1. Two types of 5S rDNA sequences were found in D. soaresi. While type I 5S rDNA sequence consists of 512 bp and includes a NTS composed of 390 bp, the NTS of type II 5S rDNA has only 249 bp. Type I 5S rDNA nucleotide sequence is identical to the 5S RNA gene found in Gastrotheca riobambae. When used as a probe, the type I 5S rDNA of D. soaresi was mapped in the long arm of chromosome pair 2 of D. seniculus and D. soaresi. Telomeric sequences used as probes detected chromosomal ends in D. seniculus, as previously observed in D. marmoratus and D. melanargyreus. However, the telomeric probes also resulted in centromeric and pericentromeric signals in the chromosomes of D. soaresi, except the telocentric pairs identified as 5 and 6. Among the three species of the D. microcephalus group analyzed herein, D. decipiens, D. meridianus and D. werneri, some differences could be noted. While D. meridianus and D. werneri had only one pair of telocentric chromosomes of medium size, D. decipiens karyotype had three telocentric pairs. The x species D. berthalutzae, which is included in the same clade of D. decipiens, has also three telocentric pairs of a medium size. The karyotypes of D. decipiens, D. meridianus and D. werneri are also similar with regards to the NOR, which was located terminally in the long arm of a telocentric/subtelocentric chromosome identified as 12. The smallest telocentric chromosomes of D. nanus were microdissected and used to construct a probe, which was able to detect chromosome pair 15 of this species. When this probe was hybridized to the karyotype of different lineages of D. nanus and D. walfordi, a small telocentric chromosome pair was also detected, which suggests their homeology. This is the first work that includes chromosome painting to study the telocentric chromosomes in Dendropsophus and preliminary results presented here suggest that this may be an interesting tool to assess the chromosomal evolution in this genus