Orientador: Edson Antunes

Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas

Resumo: A próstata é densamente inervada pelo sistema nervoso autônomo simpático, parassimpático e não-adrenérgico não-colinérgico (NANC) os quais atuam sinergicamente para o correto funcionamento deste órgão. O principal representante da inervação NANC é o óxido nítrico (NO), porém sua função na...

Resumo: A próstata é densamente inervada pelo sistema nervoso autônomo simpático, parassimpático e não-adrenérgico não-colinérgico (NANC) os quais atuam sinergicamente para o correto funcionamento deste órgão. O principal representante da inervação NANC é o óxido nítrico (NO), porém sua função na próstata ainda não está bem definida. Sendo assim, o presente trabalho utilizou o modelo de inibição crônica da NO sintase (NOS) com L-NAME para avaliar possíveis alterações funcionais, morfológicas e bioquímicas da musculatura lisa prostática (MLP) em ratos adultos Wistar (200-250 g). Os ratos foram tratados por 4 semanas com L-NAME na dose de 20 mg/kg/dia através de ingesta hídrica. Especificamente, realizamos os seguintes experimentos na próstata dos ratos controles e tratados com L-NAME: 1) curvas concentração-efeito in vitro à fenilefrina (agonista ?1-adrenérgico) e ao carbacol (agonista muscarínico não seletivo), na presença e ausência do inibidor seletivo da rho-quinase Y27632 (1 uM), e curvas concentração-efeito ao agonista purinérgico, ?,?-metileno ATP, e à estimulação elétrica (contração neurogênica); 2) curvas concentração-efeito a agentes relaxantes como nitroprussiato de sódio (doador de NO), Y27632 (inibidor da rho-quinase) e isoproterenol (agonista ?-adrenérgico); 3) determinação dos níveis de AMPc e GMPc; e 4) análise histomorfométrica. A próstata dos animais tratados cronicamente com L-NAME apresentou aumento em seu peso relativo, alterações histomorfométricas caracterizadas como aumento na área epitelial e na muscular lisa e diminuição no índice de contorno dos ácinos. A contração da MLP induzida pela fenilefrina, carbacol, ?,?-metileno ATP e estímulo elétrico foi maior nos animais tratados cronicamente com L-NAME em relação aos animais controle. A incubação in vitro com o inibidor da rho-quinase, Y27632, restaurou ao nível controle as contrações aumentadas induzidas pela fenilefrina e carbacol no grupo L-NAME. O relaxamento da MLP nos animais do grupo L-NAME produzido pelo isoproterenol foi significativamente menor comparado ao grupo controle. Não houve diferença para o relaxamento induzido pelo SNP e Y27632 entre os grupos. Os níveis de AMPc e GMPc na próstata dos animais tratados cronicamente com L-NAME foram significativamente menores em relação aos animais do grupo controle. O tratamento com L-NAME não alterou os níveis das espécies reativas de oxigênio. Em suma, nossos dados mostram que a inibição crônica de NO leva a alterações funcionais in vitro da MLP caracterizadas por aumento na resposta contrátil à fenilefrina, carbacol, ?,?-metileno ATP e ao estímulo elétrico, além de redução no relaxamento ?-adrenérgico. A inibição da via da rho-quinase in vitro restaurou os padrões contráteis para os agonistas adrenérgicos e colinérgicos. A deficiência crônica de NO gera alterações funcionais, bioquímicas e morfológicas em próstata de ratos com participação da via da rho-quinase nesse processo

Abstract: The prostate is densely innervated by the sympathetic and parasympathetic as well as non-adrenergic non-cholinergic (NANC) autonomic innervation that act synergistically for its correct functioning. The main NANC mediator is nitric oxide (NO), but the role of this mediator in the...

Abstract: The prostate is densely innervated by the sympathetic and parasympathetic as well as non-adrenergic non-cholinergic (NANC) autonomic innervation that act synergistically for its correct functioning. The main NANC mediator is nitric oxide (NO), but the role of this mediator in the regulation of prostate smooth muscle (PSM) is not well established. Thus, the present study used the model of chronic NOS inhibition with L-NAME to evaluate the functional, morphological and biochemical alterations in PSM of Wistar adult male rats (200-250 g). Rats were treated with L-NAME (20 mg/kg/day) for 4 weeks in the drinking water. Specifically, we performed the following experiments in prostates from control and L-NAME-treated rats: 1) in vitro concentration-response curves to phenylephrine (?1-adrenergic agonist) and carbachol (non-selective muscarinic agonist) in the presence and absence of the selective rho-kinase inhibitor Y27632 (1 ?M) and concentration-response curves to the purinergic agonist ?-?-methylene-ATP, as well as electrical stimulation (neurogenic contraction); 2) in vitro concentration-response curves to the relaxing agents sodium nitroprusside (NO donor), Y27632 (rho-kinase inhibitor) and isoproterenol (non-selective ?-adrenergic receptor agonist); 3) determination of cAMP and cGMP levels, and 4) histomorphometric analysis. The relative weight of the prostate from L-NAME-treated rats was greater than control animals. Histomorphometric changes characterized by an increase in epithelial acini and smooth muscle area, as well as by a decrease in luminal contour índex were found in L-NAME treated rats. The phenylephrine and carbachol-induced prostate contractions were higher in L-NAME compared with control group. Prior incubation of PSM with the rho-kinase inhibitor Y27632 (1 ?M) significantly inhibited the enhanced carbachol- and phenylephrine-induced PSM contractions in L-NAME group, restoring the Emax to control levels. The PSM contractions induced by ?,?-methylene ATP and electrical field stimulation were also greater in L-NAME compared with control group. The PSM-induced relaxations in response to SNP remained unaltered, whereas isoproterenol-induced relaxations were lower in L-NAME compared with control group. The cAMP and cGMP levels in prostate homogenate were lower in L-NAME compared with control group. No difference was found in reactive oxygen species levels. In summary, our data showed that chronic NO inhibition led to in vitro functional changes in PSM characterized by increased contractile response to phenylephrine, carbachol, ?-?-methylene-ATP and electrical-field stimulation, accompanied by reduction of ?-adrenergic-induced relaxation. The in vitro inhibition of rho-kinase pathway restored the contractile pathway for the adrenergic and cholinergic agonists. The chronic NO-deficiency generates functional, biochemical and morphological changes in rat prostate with involvement of the rho-kinase pathway in this process