Orientadores: Ronei Luciano Mamoni, Maria Heloisa de Souza Lima Blotta

Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas

Resumo: A paracoccidioidomicose (PCM), causada pelo fungo dimórfico Paracoccidioides brasiliensis (Pb), é a micose sistêmica de maior incidência no Brasil. Estudos anteriores demonstraram que a resistência ou suscetibilidade a essa infecção podem ser associadas, respectivamente, a padrões de...

Resumo: A paracoccidioidomicose (PCM), causada pelo fungo dimórfico Paracoccidioides brasiliensis (Pb), é a micose sistêmica de maior incidência no Brasil. Estudos anteriores demonstraram que a resistência ou suscetibilidade a essa infecção podem ser associadas, respectivamente, a padrões de resposta Th1 ou Th2. Recentemente, foram descritas novas subpopulações de linfócitos T, dentre elas as células Th17, que tem se mostrado importantes na proteção contra infecções fúngicas, mas cujo papel ainda não foi estudado na PCM humana. A diferenciação de células T CD4+ é modulada após o reconhecimento do patógeno por células dendríticas (DCs) por meio de vários receptores de reconhecimento padrão (PRRs), os quais modulam a diferenciação de células Th1, Th2 e Th17. Neste trabalho investigamos o papel dos receptores TLR2, TLR4 e Dectina-1 no reconhecimento de células leveduriformes de P. brasiliensis (Pb) por DCs derivadas de monócitos, assim como, a capacidade dessas DCs em modular a diferenciação de linfócitos T CD4+. Observamos que DCs expostas a células leveduriformes de Pb apresentam um fenótipo maduro (expressão de CCR7, CD83, CD86 e MHC II) e produzem citocinas (IL- ?, IL-6, IL-23, TNF-? e TFG- ?), levando à diferenciação de linfócitos T CD4+ produtores de IL-17, IFN-?, IL-22, IL-17/IL-22 e IL-17/IFN- ?. Também observamos que DCs estimuladas com células leveduriformes de Pb apresentam ativação de moléculas envolvidas na sinalização via TLRs e Dectina-1 (JNK, p38, Akt e ERK para os TLRs e Syk para Dectina-1), e que o bloqueio de Dectina-1 e/ou TLR2 resultou em um número menor de células Th17. Ao analisar a produção de citocinas por células mononucleares do sangue periférico, observamos que pacientes com a FJ da PCM apresentam produção aumentada de IL-4 e que pacientes com a FA apresentam produção elevada de IL-17 e IFN- ?. Em conjunto nossos resultados demonstram que a Dectina-1 e TLR2 são os receptores mais importantes para o reconhecimento de leveduras de Pb por células dendríticas e que esse reconhecimento pode levar à diferenciação de linfócitos T efetores produtores de IL-17 e IFN- ?. Além disso, podemos concluir que a FA da PCM apresenta uma resposta imunológica mista, com participação de linfócitos Th17

Abstract: Paracoccidioidomycosis (PCM), caused by the dimorphic fungus Paracoccidioides brasiliensis (Pb), is the most prevalent systemic mycosis in Brazil. Previous studies showed that resistance or susceptibility to PCM can be associated to a Th1 or Th2 responses respectively. More recently, Th17...

Abstract: Paracoccidioidomycosis (PCM), caused by the dimorphic fungus Paracoccidioides brasiliensis (Pb), is the most prevalent systemic mycosis in Brazil. Previous studies showed that resistance or susceptibility to PCM can be associated to a Th1 or Th2 responses respectively. More recently, Th17 response was showed to be protective in fungal infections, but there is no data about Th17 cells in human PCM. T CD4+ differentiation is elicited and shaped after pathogen recognition by dendritic cells (DCs) through several PRRs, which modulate Th1, Th2 and Th17 generation. In this study we evaluated the role of TLR-2, TLR-4 and Dectin-1 in the recognition of Pb yeast cells by monocytes derived DCs, as well as, the capability of these DCs to modulate T CD4+ lymphocytes differentiation. We observed that DCs exposed to Pb presented a mature phenotype (expression of CCR7, CD83, CD80, CD86 and MHC II) and produce cytokines (IL-1, IL-6, IL-23, TNF-? and TGF- ) that promote the differentiation of TCD4+ lymphocytes producing IL- 7, IFN-?, IL-22, IL-17/IL-22 and IL-17/IFN-?. We also observed that DCs stimulated by Pb presented activation of molecules involved in the TLRs and dectin-1 signaling (JNK, p38, AKT, ERK - for TLRs and Syk for dectin- The blockage of dectin-1 and/or TLR2 diminished the differentiation of Th17 cells. We also analyzed PBMCs from patients with the acute/juvenile form (JF) or the chronic/adult form (AF) of PCM. Our results showed that patients with JF present elevated production of IL-4 and AF patients present higher production of IL-17. Altogether our results showed that Dectin-1 and TLR-2 are the most important receptors for human DCs to recognize Pb yeast cells and to produce cytokines such as IL- , IL- ? and TNF-?. After DC activation and cytokine production these cells are able to induce Th1 and Th17 differentiation through these receptors. Also we showed that Th17 cells are a major population in AF patients