Orientador: Lucia Elvira Alvares

Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia

Resumo: A Miostatina é um regulador negativo da deposição de musculatura esquelética e mutações no gene que codifica esta proteína têm sido associadas a um aumento marcante na massa muscular de organismos vertebrados, resultado de hiperplasia e hipertrofia das fibras musculares. Nosso grupo...

Resumo: A Miostatina é um regulador negativo da deposição de musculatura esquelética e mutações no gene que codifica esta proteína têm sido associadas a um aumento marcante na massa muscular de organismos vertebrados, resultado de hiperplasia e hipertrofia das fibras musculares. Nosso grupo identificou previamente o promotor basal do gene da Miostatina e análises de bioinformática revelaram a presença de sítios evolutivamente conservados para a ligação de CREB, Meis, FXR e NFY, além de um sítio TATA. No presente trabalho nós utilizamos mutagênese sítio-dirigida para gerar diversas construções delecionais que possuem um ou mais sítios mutados, e testamos sua atividade in vitro usando mioblastos C2C12 de camundongo sob condições de proliferação e diferenciação, para analisar o papel destes sítios de ligação sobre a atividade do promotor. Os resultados mostraram que FXR aparentemente não confere efeito na atividade transcricional do promotor da Miostatina em ambos os momentos analisados, indicando que o papel regulador desta proteína pode estar relacionado ao controle da expressão da Miostatina em outro tipo celular, que não o mioblasto. O NFY apresentou um papel de ativador transcricional, enquanto CREB e Meis atuaram inicialmente como repressores durante a proliferação, passando a relaxar esta repressão durante a diferenciação dos mioblastos, permitindo que a atividade do promotor aumentasse significativamente. Trabalhando juntos, estes fatores de transcrição são capazes de manter a atividade do promotor em níveis mais baixos durante a proliferação dos mioblastos e, com o início da diferenciação, a repressão é liberada, e os níveis de atividade podem aumentar. Este padrão está de acordo com o padrão de expressão dinâmico observado para a proteína da Miostatina durante o desenvolvimento da musculatura esquelética em vertebrados

Abstract: Myostatin is a negative regulator of skeletal muscle deposition and mutations in the gene that encodes this protein have been associated to a remarkable increase in skeletal muscle mass, attributable to both hyperplasia and hypertrophy. We have previously identified Myostatin's basal...

Abstract: Myostatin is a negative regulator of skeletal muscle deposition and mutations in the gene that encodes this protein have been associated to a remarkable increase in skeletal muscle mass, attributable to both hyperplasia and hypertrophy. We have previously identified Myostatin's basal promoter and bioinformatic analyses revealed the presence of evolutionarily conserved binding sites for CREB, Meis, FXR and NFY, besides a TATA box. In the present study we used site-directed mutagenesis to generate several expression constructs possessing one or more mutated sites, and tested their activity in vitro using mouse C2C12 myoblasts in proliferation and differentiation conditions, to analyze the role of these sites on the activity of the promoter. The results show that FXR appears not to confer any effect on the transcriptional activity of the promoter in both conditions, indicating that the regulatory role of this protein might be involved in the control of Myostatin expression in another cell type. NFY presents a role as transcriptional activator, while CREB and Meis act initially as repressors during proliferation, releasing this repression upon differentiation, which allows the activity of the promoter to significantly increase. Working together, these transcription factors are capable of maintaining the promoter activity at lower levels during the proliferation of myoblasts and, upon differentiation, the repression is released, and activity levels can be increased. This pattern is in agreement with the dynamic expression pattern observed for Myostatin during the skeletal muscle development in vertebrates