Orientador: Adriana Franco Paes Leme

Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba

Resumo: A película adquirida é um filme protéico resultante da adsorção seletiva de proteínas presentes na saliva total à superfície dental. Devido ao seu contato com a superfície de esmalte, a película adquirida no esmalte desempenha um papel importante nos estágio iniciais da formação da placa...

Resumo: A película adquirida é um filme protéico resultante da adsorção seletiva de proteínas presentes na saliva total à superfície dental. Devido ao seu contato com a superfície de esmalte, a película adquirida no esmalte desempenha um papel importante nos estágio iniciais da formação da placa dental por meio da modulação da aderência bacteriana. Tem sido reportado que o tratamento do esmalte com produtos de alta concentração de fluoreto leva a formação de uma camada de mineral do tipo fluoreto de cálcio ("CaF2") em sua superfície. Sabe-se que a adsorção protéica ao esmalte é um processo específico e dependente da natureza da superfície e pouco se conhece da influência da camada de "CaF2" na composição da película salivar. A proposta deste estudo foi avaliar a composição da película salivar formada in vitro quando da aplicação de flúor fosfato acidulado no esmalte. Para tal, blocos de esmalte bovino foram aleatoriamente divididos em 3 grupos de tratamento. Cada bloco foi exposto ao tratamento com água destilada (controle negativo), solução de ácido fosfórico (controle ativo - H3PO4 0,1 M pH 3,5) ou solução de flúor fosfato acidulado (NaF 0,5 M em H3PO4 0,1 M pH 3,5) por 4 minutos. Os blocos foram então lavados, secos e imersos em saliva humana por 2 horas para a formação da película salivar. A película adquirida de cada grupo foi extraída, submetida ao protocolo de digestão com tripsina e os peptídeos gerados foram analisados por cromatografia líquida de fase reversa acoplada a uma interface com ionização por nanoelectrospray em um espectrômetro de massas LTQ Velos Orbitrap. Após processamento e análise dos dados gerados pelo espectrômetro de massas utilizando o programa Proteome Discoverer e ScaffoldQ+ foram identificadas 56 proteínas. Cada grupo de tratamento apresentou uma quantidade similar de proteínas totais identificadas e 17,8% das proteínas totais estavam presentes em todos os grupos de tratamento. Doze proteínas foram exclusivas do grupo tratado com água destilada, 11 exclusivas do grupo tratado com ácido fosfórico e 12 do grupo tratado com flúor fosfato acidulado. A quantificação relativa por contagem de espectros demonstrou que quando da aplicação de flúor fosfato acidulado no esmalte a abundância de algumas proteínas diminui, dentre elas a proteína histatina-1. Entretanto, a abundância da proteína de S100-A9, confirmada por western blot, aumentou quando a superfície de esmalte foi tratada com flúor fosfato acidulado. Os dados sugerem que a modificação causada no esmalte pela aplicação de flúor fosfato acidulado influencia a composição da película adquirida no esmalte podendo ter um impacto na posterior colonização bacteriana inicial

Abstract: The acquired pellicle is a protein film resulting from the selective adsorption of proteins present in whole saliva onto tooth surfaces. Because of its contact with enamel surfaces, the enamel pellicle plays an important role in the initial stages of plaque formation by modulating...

Abstract: The acquired pellicle is a protein film resulting from the selective adsorption of proteins present in whole saliva onto tooth surfaces. Because of its contact with enamel surfaces, the enamel pellicle plays an important role in the initial stages of plaque formation by modulating bacterial attachment. High concentrated fluoride product treatment of enamel has been reported to result in the formation of a layer of a CaF2-like material ("CaF2") on the enamel surface. Protein adsorption to enamel is a specific process dependent on the nature of the surface, and little is known about the influence of this "CaF2" layer on pellicle composition. The purpose of this investigation was to gain further insights into the in vitro pellicle components when APF application is performed. Bovine enamel blocks were randomly divided in 3 groups. Each block was exposed to distilled water (negative control), or phosphoric acid (active control - 0.1 M H3PO4 pH 3.5) or acidulated phosphate fluoride (APF) (0.5 M NaF in 0.1 M H3PO4 pH 3.5) solution for 4 minutes. Blocks were then washed, dried and immersed in human saliva for 2 hours for enamel pellicle formation. AEP from each group was collected, subjected to trypsin digestion protocol and the peptides generated were analyzed by reverse-phase liquid chromatography coupled with nanoelectrospray ionization in a LTQ Velos Orbitrap mass spectrometer. After analyses of the data by Proteome Discoverer e ScaffoldQ+ programs 56 proteins were identified. Each treatment group presented a similar amount of total identified protein and 17.8% of total proteins were present in all four groups. Twelve proteins were exclusively in the group treated with water, 11 proteins were exclusively in the group treated with phosphoric acid and another 12 proteins were only present in the discs treated with APF solution. Relative proteomic quantification showed that the abundance of some proteins decreases with APF application, such as histatin-1. However, the concentration of S100 - A9, confirmed by immunoblotting analyses, increases when enamel surface was treated with APF solution. These data suggest that the modification caused on enamel surface by APF application influences the composition of AEP and may have an impact on initial bacterial attachment