Orientadores: Francisco Humberto Nociti Junior, Cristiane Ribeiro Salmon

Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba

Resumo: Considerando-se a hipótese de que os mecanismos envolvidos na regeneração periodontal mimetizam os mecanismos associados com o desenvolvimento original de formação do periodonto, o conhecimento dos princípios biológicos iniciais de formação do periodonto é crucial para o avanço de novas...

Resumo: Considerando-se a hipótese de que os mecanismos envolvidos na regeneração periodontal mimetizam os mecanismos associados com o desenvolvimento original de formação do periodonto, o conhecimento dos princípios biológicos iniciais de formação do periodonto é crucial para o avanço de novas técnicas de bioengenharia envolvidas na regeneração periodontal. No entanto, as mudanças no perfil de expressão gênica durante as fases do desenvolvimento dos tecidos dentais não foram totalmente esclarecidos, principalmente aquelas relacionadas ao desenvolvimento da raiz dos dentes. O estudo de expressão gênica do desenvolvimento radicular ainda é um desafio pela necessidade de desmineralização prévia do tecido que apresenta um maior grau de calcificação quando comparado às fases de desenvolvimento da coroa dental. Dessa forma, o objetivo do presente estudo foi avaliar comparativamente o padrão de expressão gênica da bainha epitelial de Hertwig (HERS) e o ligamento periodontal no mesmo período experimental, e o padrão de expressão gênica do ligamento periodontal em diferentes períodos de formação radicular. Foi utilizado um camundongo Swiss Webster por período pós-natal (PN): 13 dias (PN13), 45 dias (PN45), sendo que para o período PN13 a HERS também foi avaliada (PN13 HERS). Após a captura e microdissecção do ligamento periodontal dos primeiros molares nos períodos PN13 e PN45 e das células de HERS do primeiro molar no período PN13, o sequenciamento de RNA (RNA-Seq) foi realizado para a análise do transcriptoma. Os dados obtidos do sequenciamento foram processados para a filtragem dos "reads" considerados de boa qualidade (>30 na escala "phred"). A análise dos resultados mostrou que 587 genes foram diferencialmente expressos na comparação PN13 HERS vs. PN13 sendo que 25 foram diferencialmente expressos para PN13 HERS e 562 para PN13. Também foi mostrado que 768 genes foram diferencialmente expressos na comparação PN13 vs. PN45 e desse total 764 foram diferencialmente expressos para PN13 e 4 para PN45. Quando se comparou os 13 genes identificados para PN13 HERS foi demonstrado que dois deles apresentam papel importante para o desenvolvimento embrionário em camundongos. Para PN13 na comparação com HERS e na comparação com PN45, verificou-se que 50 e 57 genes foram respectivamente escolhidos. Para PN45, 4 genes ainda não identificados foram escolhidos. No entanto, quando se compara o padrão de expressão gênica nesses períodos estudados, não foram verificadas grandes mudanças. Dessa forma, podemos concluir, dentro dos limites desse estudo, que o padrão de expressão gênica nos diferentes períodos estudados apresenta pouca variabilidade, apesar de apresentar expressão de genes diferentes em cada período

Abstract: Considering the hypothesis that the mechanisms involved in periodontal regeneration mimic the mechanisms associated with the development of the original formation of the periodontium, the knowledge of initial biological principles of periodontium development is crucial to the advancement...

Abstract: Considering the hypothesis that the mechanisms involved in periodontal regeneration mimic the mechanisms associated with the development of the original formation of the periodontium, the knowledge of initial biological principles of periodontium development is crucial to the advancement of new bioengineering techniques involved in periodontal regeneration. However, the changes in the gene expression profile during the stages of tooth development remain unclear, mainly the stages related to tooth root development. The study of root development is a challenge because of the need of previous tissue demineralization of this tissue with higher degree of calcification when compared to crown development stages. The aim of the present study was comparatively analyze the gene expression pattern of Hertwig's epithelial root sheath (HERS) and the periodontal ligament at the same experimental period, and also the gene expression pattern of the periodontal ligament at distinct periods of root formation. One Swiss Webster mice per post natal period of 13 days (PN13) and 45 days (PN45) were used. After the laser capture microdissection of the first molar periodontal ligament at PN13 and PN45 and HERS cells of the first molar at PN13, RNA Sequencing (RNA-Seq) was performed for transcriptoma analysis. Data obtained were initially processed to filter the reads considered to have good quality (> 30 at "Phred" score). Data analysis showed that 587 genes were differentially expressed at the comparison PN13 HERS vs. PN13 and of these 25 were differentially expressed at PN13 HERS and 562 at PN13. When comparing PN13 vs. PN45, a total of 768 genes were differentially expressed and of these764 were differentially expressed at PN13 and 4 genes at PN45. When observing the chosen genes at PN13 HERS, two genes have been shown to have an important role in embryonic development in mice. At PN13, when comparing PN13 HERS vs. PN13, 50 genes were chosen and at the same period PN13, when comparing PN13 vs. PN45, 57 genes were chosen. At PN45, 4 genes were chosen yet unidentified. However, when comparing the gene expression pattern in these periods studied, there were no major changes. Thus, we can conclude, within the limits of this study, that gene expression pattern in different time periods has little variability, despite showing expression of different genes in each period