Orientadores: Ricardo Della Coletta, Tuula Anneli Salo

Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba

Resumo: Embora os genes HOX sejam conhecidos por atuarem na regulação de eventos importantes para o desenvolvimento embrionário, incluindo proliferação, diferenciação e migração celular, alterações no padrão de expressão têm sido frequentemente associadas ao desenvolvimento de neoplasias malignas....

Resumo: Embora os genes HOX sejam conhecidos por atuarem na regulação de eventos importantes para o desenvolvimento embrionário, incluindo proliferação, diferenciação e migração celular, alterações no padrão de expressão têm sido frequentemente associadas ao desenvolvimento de neoplasias malignas. Estudos em nosso laboratório caracterizaram o perfil de expressão dos 39 membros da família HOX de genes homeobox em amostras orais de mucosa normal e carcinoma espinocelular (CEC), identificando genes diferencialmente expressos. Dentre estes genes destacou-se HOXA10, que tem a sua expressão associada a fenótipos importantes para o desenvolvimento tumoral e ao prognóstico. O objetivo deste estudo foi confirmar os níveis elevados de expressão de HOXA10 em CECs orais em comparação a mucosa oral normal e analisar o efeito da superexpressão e neutralização do gene HOXA10 na modulação dos principais eventos biológicos associados ao fenótipo tumoral. Os níveis de HOXA10 foram avaliados por imuno-histoquímica e qRT-PCR e os efeitos de HOXA10 sobre a proliferação, apoptose, adesão, transição epitélio-mesenquima (TEM), migração e invasão celular foram avaliados em clones celulares de queratinócitos normais HaCaT superexpressando HOXA10 e em clones da linhagem de carcinoma de língua HSC-3 expressando uma sequência de shRNA (short harpin RNA) para neutralizar a expressão de HOXA10. A expressão de HOXA10 foi significantemente maior nas amostras de CEC oral quando comparado com as amostras de tecido normal. A superexpressão de HOXA10 nas células HaCaT significantemente aumentou os níveis de expressão de N-caderina e ?-catenina, sem alteração no perfil protéico. Enquanto a adesão das células HaCaT com superexpressão de HOXA10 foi reduzida na superfície sem tratamento (plástico), na superfície tratada com colágeno tipo I foi significantemente aumentada, condizendo com o maior potencial migratório adquirido por estas células. A neutralização de HOXA10 significantemente reduziu a capacidade proliferativa das células HSC-3. Em adição, o silenciamento de HOXA10 induziu significantemente a expressão de marcadores da TEM, a adesão celular e os potenciais de migração e invasão das células HSC-3. Tanto a superexpressão quanto a neutralização de HOXA10 não modularam as taxas de apoptose. Em conclusão, os resultados deste estudo sugerem que a expressão de HOXA10 modula eventos importantes para o desenvolvimento e progressão dos CECs orais

Abstract: Although HOX genes are known for acting in the regulation of important events during embryogenesis, such as cellular proliferation, differentiation and migration, alterations in their expression patterns have been frequently associated to the development of cancers. Studies in our...

Abstract: Although HOX genes are known for acting in the regulation of important events during embryogenesis, such as cellular proliferation, differentiation and migration, alterations in their expression patterns have been frequently associated to the development of cancers. Studies in our laboratory characterized the expression profile of the 39 members of the HOX family of homeobox genes in oral samples of normal mucosa and squamous cell carcinoma (SCC), identifying differently expressed genes. Among those genes are HOXA10, which has its expression related to tumor development and prognosis. The aim of the study was to valitade the elevated levels of HOXA10 on oral SCCs comparing to the normal oral mucosa, and to analyze the effects of the overexpression and neutralization of HOXA10 in modulating the main biological events associated to tumorigenesis. The levels of HOXA10 were evaluated by immunohistochemistry and qRT-PCR, and the HOXA10 effects on proliferation, apoptosis, adhesion, epitelial-mesenchimal transition (EMT), migration and invasion were evaluated on HaCaT normal keratinocytes cells overexpressing HOXA10 and on HSC-3 tongue carcinoma cells expressing a shRNA sequence to neutralize HOXA10 expression. The expression of HOXA10 was significantly higher on oral SCC samples when compared to the normal tissue controls. HaCaT cells overexpressing HOXA10 showed higher expression of N-cadherin and ?-catenin mRNA levels, and adhesion and migration were coordinately regulated on those cells. The neutralization of HOXA10 reduced significantly the proliferation capacity of HSC-3 cells, while induced significantly the expression of EMT markers, cell adhesion as well as the migration and invasion of HSC-3 cells. Overexpression and neutralization of HOXA10 did not modulate apoptosis rates. In conclusion, the results of this study suggest that the HOXA10 expression modulates important events associated with development and progression of oral SCCs