Orientador: Nicola Amanda Conran Zorzetto

Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas

Resumo: A resposta vascular inflamatória envolve a interação complexa entre células. A adesão dos neutrófilos aos sítios inflamatórios é constituído de várias etapas que envolvem a interação das moléculas de adesão com os neutrófilos, intermediado pela L-selectina (CD62L) e pelas integrinas ?2,...

Resumo: A resposta vascular inflamatória envolve a interação complexa entre células. A adesão dos neutrófilos aos sítios inflamatórios é constituído de várias etapas que envolvem a interação das moléculas de adesão com os neutrófilos, intermediado pela L-selectina (CD62L) e pelas integrinas ?2, LFA-1 e Mac-1 (CD11a/CD18 e CD11b/CD18) com ligantes sobre o endotélio. Os eritrócitos podem aderir ao endotélio vascular usando as moléculas de adesão CD 36 e integrina VLA-4 entre outras moléculas de adesão. O mecanismo de adesão das plaquetas envolve o sequestro celular no local da lesão tecidual através da interação de quatro receptores sinérgicos: a glicoproteína GPIb/IX (CD42b/CD42a), a integrina ?2?1 (GPIa/IIa; CD49b/CD41a), a integrina ?IIb?3 (GPIIb/IIIa; CD41a/CD61), e a integrina ?5?1 (GPIc/IIIa; CD51/CD61). Em doenças associadas com a inflamação vascular, tais como a doença falciforme e aterosclerose, alterações na adesão de leucócitos à parede vascular desempenham um papel central na fisiopatologia da doença. O CD40L e o LIGHT são proteínas citocinas pertencente ao fator de necrose tumoral (TNF), tendo como receptores o CD40L, LTBR e o HVEM, respectivamente. Diante disso, este estudo objetivou avaliar os efeitos das proteínas inflamatórias CD40L e LIGHT nas propriedades adesivas dos neutrófilos, hemácias e plaquetas. Os neutrófilos, hemácias e plaquetas foram separados do sangue periférico e foram realizados ensaios de adesão estática e citometria de fluxo após estimulo destas células com as proteínas recombinantes, CD40L e LIGHT. Após incubação com CD40L ou LIGHT, os neutrófilos e hemácias da circulação periférica apresentaram alterações quanto às propriedades adesivas em relação aos neutrófilos e hemácias não estimulados. As plaquetas estimuladas com as citocinas não demonstraram alteração nas propriedades adesivas. Neutrófilos incubados com anticorpos bloqueadores das integrinas Mac-1 e LFA-1 apresentaram uma reversão no aumento das propriedades adesivas após estimulo com CD40L ou LIGHT. Os neutrófilos estimulados com as citocinas apresentaram uma diminuição na expressão proteíca de CD62L, característica de ativação celular. Nao foi observado nenhuma diferença quanto a expressão das integrinas Mac-1 e LFA-1 nos neutrófilos após estímulo com as citocinas. Esses resultados sugerem que essas proteínas inflamatórias podem aumentar as propriedades adesivas de neutrofilos (intermediado por um aumento na afinidade das integrinas) e hemácias. A presença de altas concentrações destas citocinas na circulação, como encontrados em algumas patologias caracterizadas por inflamação vascular, pode resultar em conseqüências importantes, como a indução da adesão dos leucócitos e hemácias à parede vascular

Abstract: The vascular inflammatory response involves a complex interaction between cells. The adhesion of neutrophils to inflammatory sites is composed of several stages involving the interaction of adhesion molecules on neutrophils and on the endothelium. These interactions are mediated by...

Abstract: The vascular inflammatory response involves a complex interaction between cells. The adhesion of neutrophils to inflammatory sites is composed of several stages involving the interaction of adhesion molecules on neutrophils and on the endothelium. These interactions are mediated by Lselectin (CD62L) and the ?2 integrins, LFA-1 and Mac-1 (CD11a/CD18 and CD11b / CD18, respectively) with ligands on the endothelium. The red cells may adhere to vascular endothelial adhesion molecules using CD 36 and the VLA-4 integrin and other adhesion molecules. The mechanism of adhesion of platelets involves the adhesion of these cells at the site of tissue injury through the interaction of four synergistic receptors: glycoprotein GPIb/IX (CD42b/CD42a), integrin ?2?1 (GPIa/IIa; CD49b/CD41a), integrin ?IIb?3 (GPIIb / IIIa, CD41a/CD61), and integrin ?5?1 (GPIC/ IIIa; CD51/CD61). In diseases associated with vascular inflammation, such as sickle cell disease and atherosclerosis, changes in leukocyte adhesion to the vascular wall plays a central role in the pathophysiology of the disease. The CD40L and LIGHT cytokines are proteins belonging to the tumor necrosis factor (TNF) family, and interact with the receptors, CD40L, LTBR and HVEM, respectively. Thus, this study aimed to evaluate the effects of the inflammatory proteins, CD40L and LIGHT, on the adhesive properties of neutrophils, erythrocytes and platelets. Neutrophils, erythrocytes and platelets were separated from peripheral blood and static adhesion assays and flow cytometry were performed after stimulation of these cells with the recombinant proteins, CD40L and LIGHT. After incubation with CD40L or LIGHT, neutrophils and red blood cells from the peripheral circulation showed alterations in adhesive properties compared to unstimulated neutrophils and erythrocytes. Platelets stimulated with cytokines showed no changes in adhesive properties. Neutrophils incubated with antibodies that block the functions of integrins Mac-1 and LFA-1 reversed the increase in adhesive properties after stimulation with CD40L or LIGHT. Neutrophils stimulated with cytokines showed a decrease in the protein expression of CD62L, a characteristic of cellular activation. No difference was observed in the expression of the integrins Mac-1 and LFA-1 on neutrophils after stimulation with cytokines. These results suggest that these inflammatory proteins can increase the adhesive properties of neutrophils (mediated by an increase in the affinity of the integrin) and erythrocytes. The presence of high concentrations of these cytokines in the circulation, as found in certain vascular diseases characterized by inflammation, can result in important consequences, such as the induction of the adhesion of leukocytes and red blood cells to the vascular wall