Clonagem molecular do gene ipaC de Shigella sp e estudo da expressão por Lactococcus lactis
Cristiane Mobilon
TESE
Português
T/UNICAMP M713c
[Molecular cloning and expression analysis in Lactococcus lactis of ipaC gene from Shigella sp]
Campinas, SP : [s.n.], 2012.
82 f. : il.
Orientadores: Wanderley Dias da Silveira, Eliana Guedes Stehling
Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia
Resumo: A shigelose, uma infecção intestinal grave, causada por bactérias Gram-negativas pertencentes ao gênero Shigella, é uma patologia com incidência significativa, principalmente em países em desenvolvimento, onde ocorrem 99% dos casos relatados, sendo que, 69% deles acometem crianças menores de...
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Resumo: A shigelose, uma infecção intestinal grave, causada por bactérias Gram-negativas pertencentes ao gênero Shigella, é uma patologia com incidência significativa, principalmente em países em desenvolvimento, onde ocorrem 99% dos casos relatados, sendo que, 69% deles acometem crianças menores de 5 anos de idade. A alta incidência de Shigella em países em desenvolvimento é, geralmente, atribuída à falta de saneamento básico, condições de higiene inadequadas, subnutrição e alto custo dos antimicrobianos. O modo predominante de transmissão ocorre por via fecal-oral. Os mecanismos de patogenicidade descritos para as diferentes espécies de Shigella incluem numerosos genes de virulência, sendo a maioria encontrada em um plasmídio (pINV) de 220 kb. O plasmídio pINV de S. flexneri codifica 2 operons cruciais para seu fenótipo invasivo: o operon ipa e o operon mxi-spa. O operon ipa codifica os antígenos plasmidiais de invasão denominados IpaA, IpaB, IpaC e IpaD, os quais são efetores para o processo de invasão bacteriana. O operon mxi-spa juntamente com as proteínas IpaB, IpaC e IpaD são essenciais para a invasão in vitro de células epiteliais. Sabe-se, também, que essas proteínas, ou antígenos plasmidiais de invasão, podem ser altamente imunogênicos. Neste trabalho, clonou-se o gene ipaC no vetor pET28a para expressão em Escherichia coli e em vetores constitutivos para bactérias lácticas com a finalidade de se verificar a capacidade imunogênica da proteína expressa por este gene. Além disso, verificou-se que os anticorpos produzidos pela resposta à proteína IpaC foram capazes de inibir a adesão e invasão de Shigella flexneri em culturas celulares cultivadas in vitro confirmando, assim, a importância dessa proteína no processo invasivo da bactéria e seu possível uso no desenvolvimento de futuras vacinas a serem usadas contra a shigelose
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Abstract: Shigellosis is a severe intestinal infection caused by Gram-negative bacteria which belongs to the genus Shigella. It is a pathology with high incidence and it is known that 99% of cases occur in underdevelopment countries. Among these cases, 69% of them affect children under 5 years old....
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Abstract: Shigellosis is a severe intestinal infection caused by Gram-negative bacteria which belongs to the genus Shigella. It is a pathology with high incidence and it is known that 99% of cases occur in underdevelopment countries. Among these cases, 69% of them affect children under 5 years old. The high incidence of Shigella in underdevelopment countries, is mainly atribbuted to substandard hygiene, unsafe water supplies, subnutrition and antibiotic high cost. The predominant mode of transmission is by fecal-oral contact. The pathogenicity mechanisms described for Shigella species include several virulence genes, most of them been encoded in a plasmid (pINV) with 220 kb. This plasmid encodes 2 important operons which are essential for the invasive phenotype: the operon ipa and the operon mxi-spa. The ipa operon encodes the invasion plasmid antigens called IpaA, IpaB, IpaC and IpaD, which are effector proteins required for the bacteria invasion process. The mxi-spa operon together with IpaB, IpaC and IpaD are essential to epithelial in vitro cell invasion. It is also known that these proteins or invasion plasmid antigens may be highly immunogenic. During the development of this work, ipaC gene was cloned in the plasmidial vector pET28a for expression in Escherichia coli and in constitutive vectors for lactic acid bacteria to prove its immunogenic importance. Furthermore it was verified that the antibodies produced in response to IpaC protein were able to inhibit Shigella flexneri adhesion and invasion in in vitro cultured cells, confirming its important hole in bacteria invasion process and its possible usage in vaccine development against shigellosis
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Dias da Silveira, Wanderley, 1956-
Orientador
Stehling, Eliana Guedes, 1972-
Coorientador
Brocchi, Marcelo, 1967-
Avaliador
Azevedo, Vasco Ariston de Carvalho
Avaliador
Sircili, Marcelo Palma
Avaliador
Elias, Waldir Pereira
Avaliador
Clonagem molecular do gene ipaC de Shigella sp e estudo da expressão por Lactococcus lactis
Cristiane Mobilon
Clonagem molecular do gene ipaC de Shigella sp e estudo da expressão por Lactococcus lactis
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