Orientador: Arnaldo Yoshiteru Kuaye

Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campionas, Faculdade de Engenharia de Alimentos

Resumo: Clostridium difficile é um bacilo anaeróbio responsável por doença intestinal associada ao tratamento prévio com antibióticos, manifestando desde uma diarreia leve até casos graves de colite pseudomembranosa causada principalmente pelas toxinas A (TcdA) e B (TcdB). Os casos de infecção estão...

Resumo: Clostridium difficile é um bacilo anaeróbio responsável por doença intestinal associada ao tratamento prévio com antibióticos, manifestando desde uma diarreia leve até casos graves de colite pseudomembranosa causada principalmente pelas toxinas A (TcdA) e B (TcdB). Os casos de infecção estão relacionados à contaminação em hospitais, porém pesquisas recentes sugerem possível associação ao consumo de alimentos contaminados, pois C. difficile já foi isolado de bovinos, suínos e aves e suas carnes sugerindo os animais como reservatórios. Desta forma, os estudos são de suma importância para o entendimento da transmissão da doença causada por C. difficile. Diante de poucas pesquisas de C. difficile e da inexistência de método padronizado para seu isolamento a partir dos alimentos, o trabalho consistiu em três etapas: 1) avaliação de metodologia [utilizando dois procedimentos (tratamento com álcool e plaqueamento direto) e dois meios seletivos (ágar Clostridium difficile moxalactan norfloxacina ¿ CDMNA e ágar cicloserina cefoxitina frutose ¿ CCFA)] de detecção de C. difficile em carnes (bovina moída e peito de frango [Peitoralis profundus e superficialis]); 2) avaliação da ocorrência de C. difficile em amostras de carnes resfriadas (bovina moída, bovina peça [Semimembranosus], suína [Longuisimus dorsi] e frango [Peitoralis profundus e superficialis]), compreendendo detecção, isolamento e identificação dos isolados; 3) avaliação do perfil toxigênico dos isolados através da detecção de genes tcdA e tcdB codificadores de TcdA e TcdB e respectivamente avaliação de produção do toxinas pelos isolados. A partir da comparação de dois procedimentos, observou-se que o plaqueamento direto foi mais eficaz e recuperou uma maior quantidade de C. difficile se comparado com o tratamento com álcool e o ágar Clostridium difficile moxalactan norfloxacina (CDMNA) apresentou maior taxa de recuperação em relação ao ágar cicloserina cefoxitina frutose (CCFA). A ocorrência de C. difficile foi observada em 11,5% (17/147) das amostras analisadas, totalizando 80 isolados, destes 41,2% (33/83) apresentaram positivo para pelo menos um gene de virulência (A-B+), ou para ambos os genes (A+B+). Houve concordância de 70,5% entre os testes fenotípicos e genotípicos utilizados para detecção de toxinas. Desta forma, sugere-se que alimentos de origem animal são uma potencial fonte de transmissão de C. difficile para humanos

Abstract: Clostridium difficile is an anaerobic bacillus responsible for intestinal deseases in individuals previouslly treated with antibiocs, who can manifest from a mild diarrhea to severe cases of pseudomembranous colitis, mainly caused by toxins A (TcdA) and B (TcdB). The infections are related...

Abstract: Clostridium difficile is an anaerobic bacillus responsible for intestinal deseases in individuals previouslly treated with antibiocs, who can manifest from a mild diarrhea to severe cases of pseudomembranous colitis, mainly caused by toxins A (TcdA) and B (TcdB). The infections are related to contamination in hospitals, but recent researches sugests a possible association with the consumiption of contaminated foods as C. difficile has been isolated from bovines, suines and poultries and their meat, sugesting animals as reservatories. Thus, studies are extremelly important to elucidate the transmition of the desease caused by C. difficile. Faced with few researches about this bacteria and the lack of a standard method for its isolation from food, this work is divided in three steps: 1) Evaluation of the methodology for C. difficile detection in meet (commercial bovine mince and chicken breast ¿ [Peitoralis superficialis and Peitoralis profundus] [using two procedures (treatment with alcohol and direct plating) and two selective mediums (agar Clostridium difficile moxalactan norfloxacin ¿ CDMNA and cycloserine cefoxitin fructose agar¿ CCFA)]; 2) Assessing of the occurrence of C. difficile in samples of chilled meat (bovine: commercial mince and the whole Semimembranosus; suine: whole Longuisimus dorsi; chicken: Peitoralis profundus and Peitoralis superficialis) by detection, isolation and identification of the isolated; 3) Evaluation of the toxicogenic profile of the isolated by the detection of the genes tcdA and tcdB, which are encoding of TcdA and TcdB respectivelly, and the capacity of toxine production by the isolated bacterias. From the comparison of the two proceeding above it was observed that the direct plating was more efficient and recovered a larger aumont of C. difficile than the treatment with alcohol. Furthermore, the CDMNA agar presented a higher recovery rate compared to CCFA agar. It was observed the occurrence of C. difficile in 11,5% (17/147) of the analyzed samples, comprising 80 isolates, of which 41,2% (33/83) showed a positive response for at least one virulence gene (A-B+), or for both genes (A+B-). In addition, there was a 70,5% concordance between the phenotypic and genotypic tests used to detect toxins. In this way, it is suggested that foods of animal origin are a potential source of transmission of C. difficile for humans