Orientador: Pedro Luiz Rosalen

Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba

Resumo: O presente estudo sobre a geoprópolis de Melipona scutellaris teve como objetivo avaliar suas atividades antimicrobiana contra Streptococcus mutans Staphylococcus aureus, S. aureus resistente à meticilina, Enterococcus faecalis, Actinomyces naeslundii, Pseudomonas aeruginosa e também...

Resumo: O presente estudo sobre a geoprópolis de Melipona scutellaris teve como objetivo avaliar suas atividades antimicrobiana contra Streptococcus mutans Staphylococcus aureus, S. aureus resistente à meticilina, Enterococcus faecalis, Actinomyces naeslundii, Pseudomonas aeruginosa e também antiproliferativa sobre linhagens celulares, além de caracterizar quimicamente o seu extrato etanólico e a fração química bioativa. Analisou-se também a capacidade desta fração bioativa de atuar sobre S. mutans organizado na forma de biofilme in vitro. Inicialmente obteve-se o extrato etanólico de geoprópolis (EEGP), que foi fracionado, resultando nas frações hexânica (FH), clorofórmica (FC) e acetato de etila (FAc). O EEGP e frações foram submetidos a testes antimicrobianos para determinação das concentrações inibitória mínima (CIM) e bactericida mínima (CBM). Verificada a ação antimicrobiana, o EEGP e fração bioativa foram avaliados quanto a sua citotoxicidade por meio da atividade antiproliferativa contra linhagens de células normais e tumorais. A caracterização química foi realizada por meio de análises por cromatografia líquida de alta eficiência em fase reversa (CLAE-FR) e cromatografia gasosa com espectrometria de massas (CG-EM). A fração bioativa selecionada teve a ação sobre biofilme de S. mutans testada pelos ensaios de inibição de formação de biofilme, time kill, queda de pH e por microscopia eletrônica de varredura (MEV). O EEGP foi capaz de inibir o crescimento de S. mutans e da maioria das cepas bacterianas, sendo a FH, que apresentou menor CIM. Com relação à atividade antiproliferativa, tanto o EEGP quanto a FH inibiram o crescimento de forma mais seletiva para as linhagens tumorais, porém a FH em concentrações mais baixas. A análise química do EEGP e FH indicou a presença de compostos de baixa polaridade, ausência de flavonóides e de derivados do ácido cinâmico. A FH foi efetiva na diminuição da biomassa do biofilme em ambas as concentrações estudadas (250 e 400 ?g/mL), quando comparada com o controle (p<0,05), porém não alterou a viabilidade bacteriana (time kill), nem a produção de ácidos pela bactéria (p>0,05). As análises por MEV demonstraram uma modificação na matriz do biofilme tratado com FH, verificada pela aparente perda de homogeneidade superficial. Tais dados sugerem que a geoprópolis é uma promissora fonte de compostos ativos contra algumas bactérias, com citotoxicidade maior para células tumorais que normais e também capaz de atuar sobre biofilme de S. mutans, podendo ser útil no controle de doenças biofilme dependentes, relacionadas a este microrganismo

Abstract: The present study concerning Melipona scutellaris geopropolis aimed to evaluate their antimicrobial activity against Streptococcus mutans and other pathogens of clinical importance, the antiproliferative activity on normal and tumor cell lines and to chemically characterize the ethanol...

Abstract: The present study concerning Melipona scutellaris geopropolis aimed to evaluate their antimicrobial activity against Streptococcus mutans and other pathogens of clinical importance, the antiproliferative activity on normal and tumor cell lines and to chemically characterize the ethanol extract and its bioactive chemical fraction. Further, also it analyzed the ability of this bioactive fraction acting on in vitro S. mutans biofilm. Initially it was obtained the ethanolic extract of geopropolis (EEGP), which was split, resulting in the hexane (HF), chloroform (CF) and ethyl acetate (FAC) fractions. The EEGP and fractions were tested to determine the minimum inhibitory (MIC) and minimum bactericidal concentrations (MBC) against S. mutans UA159 and five bacterial strains of clinical interest. After checked for antimicrobial activity, the EEGP and bioactive fraction were evaluated for their cytotoxicity through antiproliferative activity against normal and also tumor cells lines. The chemical characterization was performed by reverse phase high performance liquid chromatography (RP-HPLC) and gas chromatography with mass spectrometry (GC-MS). The action of selected bioactive fraction on S. mutans biofilms was evaluated by inhibition of biofilm formation, time kill, drop in pH assays, and scanning electron microscopy (SEM). The EEGP and HF were able to inhibit the growth of S. mutans and most bacterial strains, and HF presented the lowest MIC among the tested fractions. Concerning the antiproliferative activity, both EEGP and HF selectively inhibited the growth of tumor lines, but the HF at lower concentrations. Chemical analysis of EEGP and fraction indicated the presence of bioactive compounds of low polarity and the absence of flavonoids and cinnamic acid derivatives. The HF effectively reduced the biofilm biomass at both concentrations studied (250 and 400 mg / ml) compared with control (p<0.05), but did not affect bacterial viability (time kill), nor acid production by bacteria (p>0.05). The SEM analysis showed a change in the biofilm matrix treated with FH verified by the apparent loss of surface homogeneity. These data suggest that geopropolis is a promising source of active compounds against some bacteria, with more cytotoxicity to tumor cells than normal and also able to act on S. mutans biofilms, which may be useful controlling biofilm dependent diseases related to this microrganism