Orientador: Marcelo Rocha Marques

Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba

Resumo: Gelatinases são endopeptidases zinco-dependentes que formam uma das classes das metaloproteinases da matriz (MMPs). O objetivo deste estudo foi localizar, em dentina saudável de molares de ratos, onde há atividade de gelatinases por meio da técnica de zimografia in situ. Para tanto, 10 ratos...

Resumo: Gelatinases são endopeptidases zinco-dependentes que formam uma das classes das metaloproteinases da matriz (MMPs). O objetivo deste estudo foi localizar, em dentina saudável de molares de ratos, onde há atividade de gelatinases por meio da técnica de zimografia in situ. Para tanto, 10 ratos Wistar com 8 semanas de idade foram sacrificados, suas hemimandíbulas foram removidas, fixadas em paraformaldeído, lavadas em PBS+glicerol e descalcificadas em EDTA+glicerol. E, seguida as peças foram lavadas em PBS+glicerol+sucrose e incluídas em Paraplast. Cortes longitudinais da região de molares foram incubados com Dq Gelatin (Invitrogen) diluído em tampão Tris/HCl/CaCl2. Com os controles, cortes foram incubados com Dq Gelatin (Invitrogen)+inibidor de MMPs ou apenas com tampão Tris/HCl/CaCl2. Após a incubação foi possível observar, por meio de microscopia de fluorescência confocal, atividade gelatinolítica em praticamente toda a dentina, inclusive nos prolongamentos dos odontoblastos. Próximo ao limite amelo-dentinário e também na pré-dentina, observou-se maior atividade gelatinolítica em relação a toda dentina analisada. Pode-se concluir que é possível detectar atividade de gelatinases em dentina de molares de ratos por meio da técnica de zimografia in situ e que tal atividade varia em diferentes regiões da dentina. Portanto, zimografia in situ pode ser útil na investigação do papel das gelatinases de dentina em eventos como :o processo de desmineralização-remineralização da dentina, a cárie dentária e a degradação da camada híbrida, formada em procedimentos restauradores adesivos

Abstract: Objective: The purpose of this study was to evaluate the gelatinases activity in decalcified rat molars crowns by in situ zymography. Methods: Five male Wistar rats were killed and their hemimandibles were fixed in paraformaldehyde, decalcified in EDTA+Glycerol solution and embedded in...

Abstract: Objective: The purpose of this study was to evaluate the gelatinases activity in decalcified rat molars crowns by in situ zymography. Methods: Five male Wistar rats were killed and their hemimandibles were fixed in paraformaldehyde, decalcified in EDTA+Glycerol solution and embedded in paraffin. Section from the region of molars teeth were incubated with DQ gelatin (Invitrogen) and observed under confocal microscopy. Results: By using in situ zymography was possible detected gelatinolytc activity in whole crown dentin. High activity of the gelatinases was observed in the odontoblastic process, dentin-enamel junction (DEJ) and predentin. Conclusions: It was possible to evidence gelatinases activity in fixed and decalcified dentin from rat molars, and it activity was not uniformly distributed over different compartments of the dentin. In situ zymography could be a tool in studies investigating the role of the gelatinases in the dentin development and degradation