Orientadores: Daniel Saito, José Francisco Hofling

Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba

Resumo: As comunidades bacterianas presentes na cavidade bucal desempenham papel importante no equilíbrio saúde/doença em seres humanos. Nesse sentido, o estudo da composição de microambientes orais pode contribuir para uma melhor precisão no diagnóstico de doenças infecciosas e, consequentemente,...

Resumo: As comunidades bacterianas presentes na cavidade bucal desempenham papel importante no equilíbrio saúde/doença em seres humanos. Nesse sentido, o estudo da composição de microambientes orais pode contribuir para uma melhor precisão no diagnóstico de doenças infecciosas e, consequentemente, para o desenvolvimento de abordagens terapêuticas mais eficazes. A periodontite é uma doença dos tecidos de suporte do dente, caracterizada por resposta imunológica exacerbada do hospedeiro, frente à presença bacteriana no biofilme dentário. A grande diversidade bacteriana observada na cavidade bucal, aliada aos variados quadros clínicos da periodontite, ressaltam a necessidade de investigações mais aprofundadas sobre a composição bacteriana periodontopatogênica. O objetivo deste trabalho é a caracterização da comunidade bacteriana associada ao biofilme periodontopatogênico, pelo uso da técnica de Polimorfismos de Comprimento de Fragmentos Terminais de Restrição (T-RFLP). Amostras de biofilme dentário supragengival e subgengival foram coletadas de 11 pacientes portadores de periodontite. O DNA amostral foi extraído e submetido à Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) direcionada ao gene ribossomal 16S, utilizando-se iniciador senso marcado com molécula repórter fluorescente. Os produtos da PCR foram digeridos pelas endonucleases tetraméricas HhaI, MspI e RsaI e os fragmentos terminais de restrição (T-RFs) resultantes foram analisados em um sequenciador automatizado de DNA, gerando diferentes perfis de fragmentos para cada amostra. Ao todo, 19 T-RFs distintos foram detectados com a enzima RsaI (média = 6,4), 61 com MspI (média = 19,3) e 63 com HhaI (média = 16,3). Uma grande variabilidade nos perfis de restrição foi observada, sendo que 51% a 63% dos T-RFs foram detectados em menos de quatro amostras. A predição taxonômica de T-RFs in silico demonstrou a presença de gêneros bacterianos reconhecidamente periodontais, incluindo Actinomyces, Eubacterium, Fusobacterium, Haemophilus, Porphyromonas, Prevotella e Propionibacter. Embora alguns gêneros tenham sido encontrados em todas as amostras avaliadas, as análises de clusterização e estatística multivariada não demonstraram agrupamentos de perfis T-RFLP conforme paciente ou sítio amostral. Os resultados do estudo permitem concluir que a comunidade bacteriana do biofilme periodontopatogênico é bastante variável entre indivíduos, embora possua alguns gêneros predominantes

Abstract: The bacterial communities present in the oral cavity play an important role in maintaining healh/disease equilibrium. In this sense, studying the microbial compostition of the oral environment may contribute to attain a better precision in diagnosis of infectious diseases and, also, to...

Abstract: The bacterial communities present in the oral cavity play an important role in maintaining healh/disease equilibrium. In this sense, studying the microbial compostition of the oral environment may contribute to attain a better precision in diagnosis of infectious diseases and, also, to develop efficient therapeutic approaches. Periodontitis is a disease that affects the supporting tissues of the tooth, characterized by a heightened immunologic response to bacteria present in dental biofilm. The broad microbial diversity present in the oral cavity, along with the various clinical features of periodontitis, highlight the necessity of further investigations on the composition of periodontopathic biofilm. The objective of this study is the characterization of the bacterial communities associated with periodontopathic biofilm, by use of the Terminal Restriction Fragment Length Polymorphism (T-RFLP) techique. Supra and subgingival biofilm samples were collected from 11 periodontitis subjects. Total DNA was extracted from the samples and submitted to the Polymerase Chain Reaction (PCR) targeting the 16S rRNA gene, with a fluorescently labeled forward primer. PCR products were digested with the tetrameric endonucleases HhaI, MspI and RsaI, and the resulting terminal restriction fragments (T-RFs) were analyzed in an automated DNA sequencer. In all, 67 T-RFs (mean = 17.3) were detected with RsaI endonuclease, 61 T-RFs with MspI (mean = 19.3) and 19 T-RFs (mean = 6.4) with HhaI. A great variability in the restriction patterns was observed, since 51% to 63% of T-RFs were detected in less than 4 samples, and two T-RFs were exclusively found in supragingival biofilm (p = 0.018). In silico taxonomical prediction of T-RFs demonstrated the presence of well-known periodontal species belonging to the Acinomyces, Eubacterium, Fusobacterium, Haemophilus, Porphyromonas, Prevotella and Propionibacter genera. Although some species were found in all samples, clustering and multivariate statistical analysis did not reveal evident groupings of T-RFLP profiles according to patient or sampling site. The results of this study indicate that the microbiota of periodontopathic biofilm is highly variable among subjects, albeit a core microbial community may be observed