Orientadores: José Luiz Pereira, Valéria Christina Amstalden Junqueira

Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos

Resumo: Cronobacter spp (Enterobacter sakazakii) é uma bactéria patogênica oportunista, que tem sido associada a surtos e casos esporádicos de meningite, enterocolite necrosante e sepse em recém nascidos. Em 2008 as cepas dessa espécie foram divididas em várias novas espécies e transferidas para o...

Resumo: Cronobacter spp (Enterobacter sakazakii) é uma bactéria patogênica oportunista, que tem sido associada a surtos e casos esporádicos de meningite, enterocolite necrosante e sepse em recém nascidos. Em 2008 as cepas dessa espécie foram divididas em várias novas espécies e transferidas para o novo gênero Cronobacter spp. Um dos métodos mais recentes para sua detecção é o da ISO 22964 (2006), que inclui duas etapas de enriquecimento, o isolamento de colônias típicas (alfa-glicosidase positivas) no meio seletivo diferencial ESIA (Enterobacter sakazakii Isolation Agar) e a confirmação das culturas através de testes bioquímicos. Há, entretanto, necessidade de métodos e meios de cultura alternativos para o isolamento de Cronobacter spp (Enterobacter sakazakii), objetivo desse trabalho. Para isso, 83 amostras foram analisadas usando a técnica de PCR através do sistema BAX® (Dupont Qualicon), em comparação com o método cultural ISO/TS 22964:2006. Dois meios de cultura seletivos diferenciais foram usados para isolamento de culturas típicas: o Ágar de Isolamento de E.sakazakii (ESIA) e o Ágar Druggan-Forsythe-Iversen (DFI). Cronobacter spp (Enterobacter sakazakii) foi isolado em 13,25% das amostras analisadas, sendo mais freqüente em amostras de soja em grãos (destinada à preparação de bebidas à base de soja), em leite em pó e em amido de milho. Nas fórmulas infantis em pó o micro-organismo foi encontrado em 6% das amostras. A unidade analítica de 25g não se mostrou adequada para o isolamento das cepas, porque a contagem encontrada nas amostras positivas (unidade analítica de 500g) foi muito baixa (variando de <0,22 a >1,61NMP/100g). Em 27% das amostras positivas, Cronobacter spp só foi isolado de colônias atípicas (alfa-glicosidase negativas) no ESIA e/ou no DFI. Em 9% das amostras as cepas isoladas também não apresentaram pigmentação amarela no TSA. Os resultados mostraram desempenho equivalente do ESIA e do DFI, no protocolo de ensaio da ISO/TS 22964 (2006). O método do Sistema BAX® apresentou desempenho inferior ao método ISO/TS 22964 (2006), com uma alta porcentagem de resultados falsos positivos no PCR (73,33%) e uma porcentagem significativa de resultados falsos negativos na confirmação cultural (53,85%). Os resultados indicaram que, a pesquisa de Cronobacter spp (Enterobacter sakazakii) em produtos destinados à alimentação de recém nascidos, deve ser feito com unidade analítica de pelo menos 500g, preferencialmente maior, porque a contagem encontrada nas amostras positivas foi muito baixa

Abstract: Cronobacter spp (Enterobacter sakazakii) is an opportunist pathogenic bacterium, which has been associated to outbreaks and sporadically cases of meningitis, necrotizing enterocolitis and sepses in newborns. In 2008, strains of this species was divided in some new species and transferred...

Abstract: Cronobacter spp (Enterobacter sakazakii) is an opportunist pathogenic bacterium, which has been associated to outbreaks and sporadically cases of meningitis, necrotizing enterocolitis and sepses in newborns. In 2008, strains of this species was divided in some new species and transferred to the new genus Cronobacter spp. One of the most recent method used to determine the microorganisms is ISO 22964 (2006), that includes two stages of enrichment, isolation of typical colonies (positive a- glycosidase) in the differential media selective ESIA (Enterobacter sakazakii Isolation Agar) and biochemical tests for confirmation. However, it already exists alternative and rapid methods for the isolation of Cronobacter spp (Enterobacter sakazakii), which were the aim of this study. For this, 83 samples were analyzed using the Polymerase Chain Reaction method (PCR) by BAX® System (DuPont Qualicon), in comparison with ISO/TS 22964:2006 method. Two differential selective media were used to isolation of typical colonies: Agar of Isolation for E. sakazakii (ESIA) and Agar Druggan-Forsythe-Iversen (DFI). Cronobacter spp (Enterobacter sakazakii) was isolated in 13.25% of the analyzed samples being more frequent in bean (designated to prepare soy base drink), powered milk and corn flour samples. In powered infantile formula, 6% of the samples were contaminated. The analytical unit of 25g was not adequate for the isolation this microorganism, where the count detected in the positive samples (analytical unit of 500g) was very low (among of <0.22 and >1,61MPN/100g). In 27% of positive samples, Cronobacter spp (Enterobacter sakazakii) was only isolated from atypical colonies (alpha-glycosidase negative) in ESIA and/or DFI. Nine per cent (9%) of the strains isolated from samples did not show yellow pigment in the TSA. Results showed equivalent performance of both ESIA and DFI medias, following the of ISO/TS 22964 (2006) assay protocol. The PCR method (BAX® System) showed lower performance when compared with ISO/TS 22964 (2006) method. A high percentage of false positive results (73.33%) and a significant percentage of false negative results in the cultural confirmation (53.85%) were observed with PCR method. The results indicated that the research of Cronobacter spp (Enterobacter sakazakii) in products destined to the feeding of just born, must be made with analytical unit of at least 500g (or major quantity) due to the counting found in the positive samples was very low