Orientador: Jose Francisco Figueiredo

Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia

Resumo: Neste trabalho, avaliamos a distribuição das soluções conservadoras utilizando a técnica de coloração de Hanssen modificada em nosso Laboratório, no rim de rato perfundido por uma pressão correspondente a 120 cm de água, aproximadamente 80 mmHg. Esta técnica está baseada em dados que...

Resumo: Neste trabalho, avaliamos a distribuição das soluções conservadoras utilizando a técnica de coloração de Hanssen modificada em nosso Laboratório, no rim de rato perfundido por uma pressão correspondente a 120 cm de água, aproximadamente 80 mmHg. Esta técnica está baseada em dados que demonstram que o ferrocianeto de sódio pode ser filtrado e se distribui de forma uniforme no parênquima renal pelas vias tubular, venosa e intersticial. A visualização deste ferrocianeto de sódio injetado está baseada na sua propriedade química de que em meio ácido se transforma em ferrocianeto férrico (azul da Prússia) Neste protocolo utilizamos as seguintes soluções para infusão: Krebs-Henseleit modificada (KH - Controle), Collins (Co), Euro-Collins (EC) e Universidade de Wisconsin (UW), analisando a sua distribuição após perfusão a 10° C com estas soluções e conservação do órgão por períodos de 0,1 e 24 horas, em banho de gêlo (aproximadamente 4°C) . Os nossos resultados morfológicos, avaliados pela coloração, indicam que a solução de KH se distribui heterogeneamente quando comparadas às demais soluções, após os três períodos de conservação, enquanto as soluções de Co,EC e UW se distribuíram com maior eficácia pelo parênquima renal. Dentre estas últimas, observamos que a solução de Co se distribuiu com heterogeneidade maior após os três períodos de conservação, ficando este fato mais evidente na conservação por 1 hora. EC e UW se distribuíram homogeneamente em relação a Co e KH após 0 e 1 hora, enquanto após 24 horas, EC apresentou distribuição semelhante à de Co. Dentre as soluções utilizadas, UW, após os três períodos de conservação, foi a solução que melhor se distribuiu pelo parênquima renal. Este achado nos permite inferir que as soluções de EC e UW são capazes de atingir uma maior população de néfrons os quais poderiam ser melhor conservados. Um outro aspecto estudado foi o fluxo de perfusão pelo lado sanguíneo (Artéria-Veia) e a percentagem de rins que apresentaram filtrado passível de coleta durante a perfusão, nos rins de rato perfundidos com as soluções previamente utilizadas na análise morfológica, nas mesmas condições experimentais de temperatura e pressão já citadas acima, bem como nos mesmos grupos experimentais (0,1 e 24 horas de conservação). Os nossos resultados nos permitem concluir que UW parece ser a solução que mais se configura à conservação ideal do rim para o transplante pois nas nossas condições experimentais apresentou fluxo de perfusão-0h diferente e maior que os demais grupos experimentais sendo maior que todos na primeira hora e apenas menor que EC na reperfusão após 24 h, porém com um índice de apenas 8% de filtração na perfusão inicial. Desta forma, nestes períodos de conservação e reperfusão subseqüente, seria uma solução com pouca probabilidade de atingir o epitélio tubular, o que poderia acarretar efeitos deletérios do lado luminal destas células tubulares (Figueiredo et ai, Transplanlation, 1986). Tal técnica original pode se constituir numa forma de avaliação da efetividade da solução conservadora, o que refletiria de certo modo numa melhor função global do rim pós-reimplante. Assim, este tipo de avaliação morfológica e funcional, embora não ideal, poderá abrir perspectivas na experimentação de novas soluções de conservação acopladas com outras técnicas, para análise da distribuição e atuação das mesmas na manutenção da viabilidade do órgão durante o transplante clínico ou experimental

Abstract: This work was designed to check the distribution of several preservation solutions using the Hanssen's technique modified by our Laboratory. After perfusing the rat kidney with a correspondent pressure of 120 cm of water, about 80 mmHg, with several preservation solutions, it was followed...

Abstract: This work was designed to check the distribution of several preservation solutions using the Hanssen's technique modified by our Laboratory. After perfusing the rat kidney with a correspondent pressure of 120 cm of water, about 80 mmHg, with several preservation solutions, it was followed by perfusing with sodium ferrocyanide which can be filtered and distributed unifonnly over the kidney parenchima by the tubular, venous and interstitial ways. The sodium ferrocyanide has a chemistry property of been transfonned in ferric ferrocyanide (Prussian blue) when exposed to acid medium (femc chloride) and stained the kidney parenchima. This maneuver pennits to see the distribution of the solution. ln this protocol, the following solutions used were: Mod({ied Krebs-Henseleit (KH), Collins (Coj, EuroCollins (ECj and University of Wisconsin (UW), and the distribution was analysed after their perfusion at 10° C, and conservation periods of O, 1 and 24 hours in ice bath (nearly 4° C). Our morphological results, analysed by the colour pictures, indicates that the KH solution distributes heterogeneously when compared to the other groups, after all conservation periods, while the Co, EC and UW solutions distributes more efficiently by the kidney parenchima. From those solutions, the Co distributes heterogeneously after the conservations periods. EC and UW distributes homogeneously compared to Co and KH after O and 1 hour, while after 24 hours EC presented distribution similar to Co. Considering the used solutions, UW, after alI conservation periods, was the best solution that distributes by the kidney parenchima. This results pointed out that EC and UW were able to gain a high number of nephron's unit that could get best perfonnance. Another aspect that was studied was the perfusion flux by the blood síde (arterial-venous) and the percentage of kidney able to filter during the perfusion. For this purpose, the kidney were perfused with the preservations solutions used for morphological al1alyses, at the same condition of temperature and pressure, and at the same groups (O, 1 and 24 hour of conservation periods). Our results led us to conclude that UW is more effective to preserve the kidney to transplantation because it presented a different and higher perfusion flux-Oh compared to the other experimental groups and it was higher at the 1 hour and lower than EC only after 24 hours of preservation. By the other hand, UW presented the lowest index of filtration at the beginning perfusion (8%). Therefore, UW could be a solution with a little probability of gaining the tubular epithelium layer, fact that would result in deleterious effects at the luminal side of this tubular cells (Figueiredo et ai, 1986). This original technique can be valuable tool to study effectiveness of preservation solutions, which would works to get better kidney function post reimplant. This kind of morphological and physiological approach is not ideal but could open perspectives to check new preservation solutions and could be associated to the other techniques to analyse their distribution and action for the best maintenance of organ viability during the clinical or experimenta transplant