Orientador: Sara T. Olalla Saad

Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas

Resumo: No presente trabalho foram analisados 10 pacientes com EIH e seus familiares através do estudo das proteínas totais em SDS-P AGE (Sistema Fairbanks 3,5-17% e Sistema Laemmli 12%), estudo da auto-associação de heterodímeros de espectrina e digestão tríptica da espectrina. Seis destas famílias...

Resumo: No presente trabalho foram analisados 10 pacientes com EIH e seus familiares através do estudo das proteínas totais em SDS-P AGE (Sistema Fairbanks 3,5-17% e Sistema Laemmli 12%), estudo da auto-associação de heterodímeros de espectrina e digestão tríptica da espectrina. Seis destas famílias apresentaram defeito na auto-associação dos heterodímeros de espectrina, sendo dois casos de Sp a 1150-46, três famílias com Sp a 1165e uma família com uma ß-espectrina encurtada, conforme evidenciado por técnica de westem-blotting com anticorpo anti-ß espectrina. Numa das famílias com Sp a 1165, um dos pacientes apresentou também uma ß-espectrina alongada, mas esta associação não determinou maior gravidade da doença ou aumento dos dímeros de espectrina. Uma família e um paciente apresentaram deficiência de proteína 4.1 e em dois casos não foi possível detectar, pela metodologia empregada, o defeito proteico. Nos pacientes Sp a 1165 kDa a pesquisa de heteroduplex após a amplificação do exon 4 do DNA genômico da cadeia alfa da espectrina demonstrou o aparecimento de uma banda com migração retardada nas três famílias estudadas sugerindo a duplicação do codon TTG. Em uma paciente Sp a 1150-46 kDa o sequenciamento do exon 6 da cadeia a-sp mostrou uma mutação de ponto CTG leu -+ CCG pro em um alelo no codon 260. Este é o primeiro estudo das alterações proteicas da ElH na população brasileira. A ß-espectrina alongada observada neste trabalho é o segundo caso descrito na literatura enquanto que a ß-espectrina "truncada" é, provavelmente, a menor ß-sp já descrita. O estudo da auto-associação dos heterodíineros de espectrina foi também levado a efeito em 26 pacientes com doenças cujo aparecimento de eliptócitos no esfregaço de sangue periférico era freqüente (7 LMC, 6 mielofibrose, 5 anemia ferropriva, 3 anemia megaloblástica e 5 anemia falciforme). Destes, um paciente com LMC apresentou aumento de dímeros de espectrina sugerindo, neste caso, um prejuízo na auto-associação de heterodímeros de espectrina

Abstract: The aim of this work was to study the protein defects in Hereditary Elliptocytosis (HE) in a brazilian population and to analyse the self-association of spectrin in patients without HE whose elliptocytes are frequently observed. Red cell membrane of ten patients with HE and their rei...

Abstract: The aim of this work was to study the protein defects in Hereditary Elliptocytosis (HE) in a brazilian population and to analyse the self-association of spectrin in patients without HE whose elliptocytes are frequently observed. Red cell membrane of ten patients with HE and their rei atives were investigated by SDS-PAGE (Fairbanks' system 3,5-17% and Laemmli's system 12%), by non denaturing gels for spectrin heterodimer self-association study and by the tryptic digestion of spectrin. Six families presented a defect in the spectrin self-association: two had Sp a I/50-46, three with Sp a I/65 and one with a "truncated" ß-spectrin as observed by westem-blotting using anti-ß espectrin antibody. In one family with Sp a I/65, one patient presented also a elongated ß-espectrin but this association did not increase the amount of spectrin dimers or the clinical severity of the disease. One family and one patient presented a deficiency of protein 4.1 and in two families, the protein defect was not detected by the approach used in this study.In the Sp a I/65 kDa patients, the analysis of heteroduplex after amplification of exon 4 of the genomic DNA for the a-spectrin chain revealed the appearance of a slower migrating band in the three families studied suggesting the duplication of codon TTG. In one patient with Sp a I/50-46 kDa the sequencing of exon 6 of the a-sp chain showed a point mutation CTG leu - CCG pro in an allele in codon 260. As far as we know, this is the first study of red cell membrane in hereditary elliptocytosis in a brazilian population. The elongated ß -spectrin observed in this study is the second case described in the literature and the truncated ß-spectrin probably corresponds to the smaller ß-sp already described.The study of the spectrin heterodimer self-association was also performed in 26 patients with diseases in which elliptocytes are frequently observed in peripheral blood smears (7 CML, 6 myelofibrosis, 5 iron deficiency anemia, 3 megaloblastic anemia and 5 sickle cell disease). Only one patient with CML had increased IeveIs of the spectrin dimer, which suggested a defect in the spectrin heterodimer self-association