Transição de permeabilidade mitocondrial em mitoplastos de fígado de rato
Juliana Aparecida Ronchi
DISSERTAÇÃO
Português
T/UNICAMP R667t
[Mitochondrial permeability transition in rat liver mitoplasts]
Campinas, SP : [s.n.], 2010.
89 f. : il.
Orientadores: Aníbal Eugênio Vercesi, Róger Frigerio Castilho
Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas
Resumo: A transição de permeabilidade mitocondrial (TPM) é caracterizada pela abertura de um poro protéico não seletivo na membrana mitocondrial interna, o qual é induzido por Ca2+ e sensível à ciclosporina A. Trabalhos anteriores do nosso laboratório demonstram que o poro de transição de...
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Resumo: A transição de permeabilidade mitocondrial (TPM) é caracterizada pela abertura de um poro protéico não seletivo na membrana mitocondrial interna, o qual é induzido por Ca2+ e sensível à ciclosporina A. Trabalhos anteriores do nosso laboratório demonstram que o poro de transição de permeabilidade ocorre devido a ligações entre tióis (S-S) de proteínas, ocasionando a agregação de proteínas de membrana interna. Contrariamente, dados da literatura propõem a participação de proteínas da membrana mitocondrial externa na composição do poro, como o canal aniônico voltagem dependente (VDAC), hexoquinase e receptor benzodiazepínico. Para verificar a participação de proteínas da membrana externa no poro TPM, realizamos experimentos utilizando mitocôndrias desprovidas de membrana externa (mitoplastos). Mitoplastos de fígado e rim de rato foram obtidos através do tratamento de mitocôndrias com o detergente digitonina (seletivo para colesterol) para eliminar a membrana externa. Esses mitoplastos de fígado apresentaram menos que 5% e 10% dos marcadores de membrana externa monoamino oxidase e VDAC, respectivamente. Os mitoplastos de rim apresentaram depleção parcial de hexoquinase (73%). Os mitoplastos tiveram redução de 70% na velocidade de fosforilação do ADP, o que foi parcialmente recuperado pela adição de citocromo c exógeno. Estes mitoplastos foram capazes de gerar e sustentar potencial elétrico de membrana suficiente para fosforilar ADP. Como previsto, os mitoplastos sofreram TPM induzido por Ca2+ de modo semelhante às mitocôndrias. Os mitoplastos foram sensíveis a conhecidos indutores de TPM como Ca2+ e tert-butil hidroperóxido ou inibidores como ciclosporina A, quelantes de Ca2+, ADP, redutor ditiol e ainda catalase. Conjuntamente, nossos resultados indicam que a membrana mitocondrial externa não é necessária para a formação/abertura do poro de TPM.
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Abstract: Mitochondrial permeability transition (MPT) is a Ca2+-induced opening of a nonselective proteinaceous membrane pore sensitive to cyclosporin A in the inner membrane. Data from our laboratory provided evidence that MPT is assembled by the aggregation of inner membrane proteins due to the...
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Abstract: Mitochondrial permeability transition (MPT) is a Ca2+-induced opening of a nonselective proteinaceous membrane pore sensitive to cyclosporin A in the inner membrane. Data from our laboratory provided evidence that MPT is assembled by the aggregation of inner membrane proteins due to the formation of thiol cross-linking. Alternatively, literature data propose the participation of a number of other outer membrane proteins in the composition of the MPT pore, such as, voltage-dependent anion channel (VDAC), hexokinase and the benzodiazepine receptor. In order to ascertain the independence of outer membrane proteins to generate the MPT we performed experiments with mitochondria devoid of outer membrane (mitoplasts). Liver and kidney mitoplasts were obtained by use of cholesterol-specific detergent digitonin to eliminate the outer membrane. Compared with the mitochondria, liver mitoplasts retained less than 5% and 10% of the markers of the outer membrane monoamine oxidase and VDAC, respectively. Kidney mitoplasts also showed a partial depletion of hexokinase (~73%). Mitoplasts presented with a 70% lower oxygen consumption rate during ADP phosphorylation ,which was partially reverted by the addition of exogenous cytochrome c. Mitoplasts were able to generate and sustain a membrane potential high enough to phosphorylate ADP. As hypothesized, these mitoplasts undergo Ca2+ induced MTP with similar properties as compared to intact mitochondria. Mitoplast MPT was sensitive to known permeability transition inducers such as Ca2+ and tert-butyl hydroperoxide and to inhibitors such as cyclosporin A, Ca2+ chelators, ADP, dithiol reductant and catalase. Altogether, the data indicate that the outer membrane is not necessary for MPT assembling or opening.
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Vercesi, Anibal Eugenio, 1946-
Orientador
Castilho, Roger Frigério, 1972-
Coorientador
Faria, Eliana Cotta de, 1950-
Avaliador
Fernandes, Jose Roberto Meyer
Avaliador
Transição de permeabilidade mitocondrial em mitoplastos de fígado de rato
Juliana Aparecida Ronchi
Transição de permeabilidade mitocondrial em mitoplastos de fígado de rato
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