Caracterização fenotípica e funcional das células T CD4+CD28null em pacientes com doença coronariana e indivíduos saudáves portadores de fatores de risco para aterosclerose
Fábio Haach Téo
DISSERTAÇÃO
Português
T/UNICAMP T264c
[Phenotypic and functional characterization of CD4+CD28null Tcells in patients with coronary artery disease and healthy individuals with and without risk factors for atherosclerosis]
Campinas, SP : [s.n.], 2010.
143 p. : il.
Orientadores: Maria Heloisa Souza Lima Blotta, Juliano Lara Fernandes
Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências
Resumo: A aterosclerose é uma doença inflamatória caracterizada por uma intensa atividade imunológica que culmina na formação de lesões nos vasos sanguíneos. As síndromes coronarianas agudas (SCA) representam graves complicações da aterosclerose. Pacientes com SCA podem ser diferenciados de...
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Resumo: A aterosclerose é uma doença inflamatória caracterizada por uma intensa atividade imunológica que culmina na formação de lesões nos vasos sanguíneos. As síndromes coronarianas agudas (SCA) representam graves complicações da aterosclerose. Pacientes com SCA podem ser diferenciados de indivíduos saudáveis pela frequência aumentada de células T CD4+ CD28null no sangue periférico. Tais células têm sido relacionadas a processos inflamatórios crônicos, como os que ocorrem em indivíduos portadores de fatores de risco clássicos para a doença aterosclerótica. O objetivo do presente estudo foi avaliar as possíveis diferenças quanto ao número e as características das células T CD4+ CD28null presentes no sangue periférico de pacientes com doença coronariana e indivíduos saudáveis com ou sem fatores de risco para o desenvolvimento de aterosclerose. Para tanto, células mononucleares do sangue periférico (CMSP) de controles (C), indivíduos portadores de fatores de risco (FR), pacientes com angina estável (AE) e pacientes com síndromes coronarianas agudas (SCA) foram diretamente submetidas à citometria de fluxo (ex vivo) para quantificação de células CD4+ CD28null e detecção de perforina, granzimas A e B, granulisina, CD161, CCR5, CCR7, CXCR3, IFN-? e TNF-?. As células foram cultivadas na presença de anti-CD3 e ionóforo de cálcio por 6hs com posterior análise da expressão de citocinas inflamatórias e também com LPS por 48hs, seguida da avaliação da expressão de moléculas citotóxicas e receptores de homing frente a estímulo inflamatório. A concentração plasmática da proteína C reativa (PCR) também foi determinada. Nossos resultados mostraram que a porcentagem de células CD4+ CD28null em relação aos linfócitos totais do sangue periférico foi similar em todos os grupos. A análise ex vivo mostrou que a população de células CD4+ CD28null apresenta maior expressão de grânulos citotóxicos (granzimas A e B, perforina e granulisina) e dos receptores de homing CCR5 e CD161 quando comparadas à população de células CD4+CD28+, enquanto que a expressão do CCR7 e do CXCR3 é menor. A frequência de células IFN-g+ foi maior na população CD4+ CD28null. Tal padrão se repetiu em todos os grupos, com praticamente todos os parâmetros se comportando dessa maneira. Entretanto, quando comparamos as células CD4+ CD28null dos diferentes grupos, verificamos que a perforina e as granzimas A e B foram mais frequentes nas células de indivíduos com fatores de risco e pacientes com SCA. Com relação às moléculas de homing e ao IFN-?, houve maior positividade para CCR7 nas CD4+ CD28null de controles e pacientes AE, enquanto o IFN-? foi mais frequente nas células dos pacientes AE. A estimulação das CMSP com anti-CD3 e ionóforo de cálcio mostrou que as células CD4+ CD28null dos grupos FR e SCA têm maior capacidade inflamatória quando comparadas às células de controles e de pacientes AE, o que foi evidenciado por um maior aumento na positividade para o TNF-?. Após estimulação das CMSP com LPS, a população CD4+ CD28null apresentou diminuição da expressão dos grânulos citotóxicos analisados, o que ocorreu em todos os grupos. Com relação às moléculas de homing, a estimulação com LPS causou uma diminuição da frequência de CD4+ CD28null positivas para CCR5 em todos os grupos, enquanto houve aumento da positividade para o CXCR3 nas células do grupo AE. Os pacientes SCA apresentaram as maiores concentrações plasmáticas de PCR, seguido pelos indivíduos do grupo FR e finalmente pelos controles e pacientes AE. Coletivamente, nossos resultados mostraram que os fatores de risco para aterosclerose causam alterações fenotípicas na população CD4+ CD28null, tornando-a mais citotóxica e inflamatória, o que poderia estar associado com a inflamação subclínica observada nessas condições. Além disso, os dados sugerem que as células CD4+ CD28null degranulam e alteram a expressão de receptores de homing quando estão em ambiente inflamatório, como ocorre na placa aterosclerótica e/ou na vigência de infecções microbianas
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Abstract: Atherosclerosis is an inflammatory disease characterized by an intense immunological activity, resulting in vascular lesions. The acute coronary syndromes (ACS) are one of the complications of atherosclerotic disease. Patents with SCA can be differentiated from healthy individuals by an...
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Abstract: Atherosclerosis is an inflammatory disease characterized by an intense immunological activity, resulting in vascular lesions. The acute coronary syndromes (ACS) are one of the complications of atherosclerotic disease. Patents with SCA can be differentiated from healthy individuals by an increased frequency of CD4+ CD28null T cells in peripheral blood. These cells have been associated with chronic inflammatory processes, which occur in individuals with risk factors for coronary artery disease. This study aimed to evaluate the possible differences regarding the number and characteristics of peripheral blood CD4+ CD28null cells from patients with coronary artery disease and healthy individuals with and without risk factors for atherosclerosis. In order to achieve this goal, peripheral blood mononuclear cells (PBMC) from healthy controls (C), individuals with risk factors (RF), patients with stable angina (SA) and patients with acute coronary syndromes (ACS) were analyzed by flow cytometry (ex vivo) to quantify CD4+CD28null cells and to detect the expression of perforin, granzymes A and B, granulysin, CD161, CCR5, CCR7, CXCR3, IFN-? and TNF-?. Cells were cultured with anti-CD3 and calcium ionophore for 6 h and analyzed regarding inflammatory cytokine expression. The cells were also cultured with LPS for 48h to evaluate expression of cytotoxic molecules and homing receptors in response to inflammatory stimulus. The plasmatic concentrations of C reactive protein (CRP) were also measured. Our results showed that the percentage of CD4+ CD28null cells in relation to total lymphocytes in peripheral blood was similar in all groups. Regarding the CD4+ CD28null population phenotype, it was observed an increased expression of cytotoxic molecules (granzymes A and B, perforin and granulysin) and homing receptors CCR5 and CD161 compared to CD4+CD28+ population. In contrast, expression of CCR7 and CXCR3 was decreased in CD4+ CD28null population. IFN-? frequency was also increased in CD4+ CD28null cells. This pattern was found in all groups, in relation to almost all analyzed parameters. Nevertheless, when CD4+ CD28null cells from the different groups were compared, it was observed that the positivity for perforin and granzymes A and B were increased in cells from individuals with risk factors and ACS patients. On the other hand, granulysin was more frequent in CD4+ CD28null cells from AS patients and controls. Moreover, the positivity for CCR7 was increased in CD4+ CD28null cells from control and SA patients while IFN-? was more frequent in cells from SA patients. PBMC stimulation with a anti-CD3 and calcium ionophore for 6h showed that CD4+ CD28null cells from RF and ACS groups have an increased inflammatory capacity when compared to cells from control subjects and AE patients, which is evidenced by a bigger increase in positivity for TNF-?. After PBMC stimulation with LPS for 48hs, CD4+ CD28null population had a decrease in cytotoxic molecules expression, fact that occurred in all groups. Regarding the homing molecules, LPS stimulation caused a huge decrease of CCR5 frequency in CD4+ CD28null cells from all groups while there was a significant increase of positivity for CXCR3 in the cells from SA patients. The highest CRP plasmatic concentrations were found in ACS patients, followed by subjects from RF group. The lowest levels were found in controls and SA patients. Taking together, our results show that risk factors for atherosclerosis lead to phenotypic alterations in CD4+ CD28null population, which became more cytotoxic and inflammatory. Such alterations may be associated with the low-grade inflammation found in patients with hypertension, diabetes, dyslipidemia and smocking. Beyond that, our data suggests that CD4+ CD28null cells degranulate and modify homing receptor patterns when they are in an inflammatory environment, which takes place in atherosclerotic lesions and/or infections
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Blotta, Maria Heloisa de Souza Lima, 1953-
Orientador
Fernandes, Juliano Lara
Coorientador
Cesena, Fernando Henpin Yue
Avaliador
Caracterização fenotípica e funcional das células T CD4+CD28null em pacientes com doença coronariana e indivíduos saudáves portadores de fatores de risco para aterosclerose
Fábio Haach Téo
Caracterização fenotípica e funcional das células T CD4+CD28null em pacientes com doença coronariana e indivíduos saudáves portadores de fatores de risco para aterosclerose
Fábio Haach Téo
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