Estudos experimentais com isolados do metapneumovirus aviário (aMPV) subtipos A e B em frangos de corte
Márcia Bianchi dos Santos
TESE
Português
T/UNICAMP Sa59e
[Experimental studies with avian metapneumovirus (aMPV) subtypes A and B isolate in broiler chickens]
Campinas, SP : [s.n.], 2010.
88 f. : il.
Orientadores: Clarice Weis Arns, Fernando Rosado Spilki
Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia
Resumo: O Metapneumovirus aviário (aMPV) pertence à família Paramyxoviridae, subfamília Pneumovirinae, gênero Metapneumovirus. O vírus, relatado pela primeira vez no Brasil em 1995, é o agente etiológico da Rinotraqueíte em perus (TRT) e está associado também à Síndrome da Cabeça Inchada (SHS) em...
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Resumo: O Metapneumovirus aviário (aMPV) pertence à família Paramyxoviridae, subfamília Pneumovirinae, gênero Metapneumovirus. O vírus, relatado pela primeira vez no Brasil em 1995, é o agente etiológico da Rinotraqueíte em perus (TRT) e está associado também à Síndrome da Cabeça Inchada (SHS) em frangos e poedeiras comerciais. O presente estudo foi dividido em três partes. Na primeira foi avaliada a suscetibilidades de oito sistemas celulares para a propagação de amostras virais do aMPV subtipos A e B. As células chicken embryo related (CER), Vero e baby hamster kidney cells (BHK-21) demonstraram ser as mais apropriadas para a multiplicação de ambos os subtipos. Além disso, cultivo de anel de traquéia (TOC) e cultivo primário de embrião de galinha (CEF) foram permissíveis à infecção por aMPV após terem sido isolados e propagados em CER. As curvas da cinética viral foram realizadas nas três linhagens celulares e ambos os subtipos tiveram títulos mais altos em CER durante as primeiras 30 horas após a infecção. Não foram observadas diferenças significativas entre os títulos obtidos em células CER e Vero, demonstrando que as células CER são tão adequadas à propagação do aMPV quanto as células Vero. A segunda parte do trabalho consistiu em analisar a virulência de uma amostra de aMPV subtipo B após sofrer passagens seriadas em células CER. Cinco variantes provenientes das passagens em CER foram inoculadas em galinhas e a excreção viral foi analisada. Os resultados obtidos com as amostras de traquéia demonstram que a virulência do aMPV diminui gradualmente enquanto o título viral aumenta com o número de passagens. Em contrapartida, nas amostras de seio nasal foi observado aumento da carga viral, demonstrando que não houve diminuição no fitness viral para este órgão. As seqüências do gene G das amostras utilizadas para desafio foram obtidas, porém este gene parece não ser afetado pela propagação em células CER. Na terceira e última parte deste estudo, foi avaliada a proteção viral conferida por uma vacina comercial contra isolados brasileiros do aMPV subtipos A e B em frangos de corte. Para tanto, uma amostra de cada subtipo foi avaliada quanto à sua virulência. O isolado do subtipo B foi detectado em um período mais longo e em maiores quantidades quando comparado ao subtipo A. Os resultados da analise da proteção demonstram que algumas aves imunizadas receberam proteção viral completa contra o vírus virulento heterólogo. Porém, a mesma vacina forneceu proteção viral parcial quando as aves foram desafiadas com o vírus virulento homologo ao vacinal
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Abstract: Avian metapneumovirus (aMPV) belongs to the Paramyxoviridae family, Pneumovirinae subfamily, within the genus Metapneumovirus. The virus, first described in Brazil in 1995, is responsible for an acute rhinotracheitis in turkeys (TRT) and is associated with swollen head syndrome in broiler...
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Abstract: Avian metapneumovirus (aMPV) belongs to the Paramyxoviridae family, Pneumovirinae subfamily, within the genus Metapneumovirus. The virus, first described in Brazil in 1995, is responsible for an acute rhinotracheitis in turkeys (TRT) and is associated with swollen head syndrome in broiler chickens and layer hens. The present study is divided in three parts. In the first part, eight cell culture systems were evaluate for the propagation of aMPV subtypes A and B. The chicken embryo related (CER) cells, Vero and baby hamster kidney cells (BHK-21) cells were shown to be the most appropriate for propagation of both subtypes of aMPV. In addition, propagation of aMPV in chicken embryo fibroblasts (CEF) and tracheal organ culture (TOC) remained efficient after the primary isolation and several passages of viruses in the CER cell line. The growth curves were created using CER, Vero and BHK-21 cell lines. Compared with growth, both yielded higher titres in CER cells during the first 30 hours after infection, but no significant difference was observed in the results obtained from CER and Vero cells. This data show that CER cell are adequate for aMPV propagation, giving similar results to Vero cells. The second part of this study was conducted to analyze the virulence of an aMPV subtype B strain after serial passage in CER cells. To accomplish this, chickens were infected with 5 different variants derived from serial passage and the amount of viral shedding was determined. The results of tracheal samples showed that the virulence decreases gradually with passage, while in vitro viral titre increases. However, an increase in viral shedding was observed in sinusal samples, demonstrating no decrease in fitness for this organ. The G gene sequences of challenge samples were analyzed, however this gene appears to not be affected when aMPV is propagated in CER cells. Finally, the last part of this study aimed to examine a commercially available vaccine in broiler chickens in terms of it ability to provide virological protection against aMPV subtypes A and B. To accomplish this, the virulence of each virulent strain was analyzed. The results demonstrate that the subtype B virulent strain could be observed longer and in larger quantities compared to subtype A. A complete heterologous virological protection was provided by the subtype B vaccine; however, a lack of complete homologous virological protection was observed when chickens were challenged with the homologous subtype B strain
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Arns, Clarice Weis, 1956-
Orientador
Spilki, Fernando Rosado, 1975-
Coorientador
Verinaud, Liana Maria Cardoso, 1959-
Avaliador
Simoni, Isabela Cristina
Avaliador
Meireles, Marcelo Vasconcelos
Avaliador
Montassier, Helio
Avaliador
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Márcia Bianchi dos Santos
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