Orientador: Yong Kun Park

Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos e Agricola

Resumo: Utilizando-se duas espécies distintas de Bacillus, B. amyloliquefaciens ATCC 2342 e o B. natto, isolado do produto comercial "Natto", respectivamente, bons produtores de ?-amilase e proteases, conseguiu-se aumentar os níveis de produção destas enzimas, através das técnicas de transformação e...

Resumo: Utilizando-se duas espécies distintas de Bacillus, B. amyloliquefaciens ATCC 2342 e o B. natto, isolado do produto comercial "Natto", respectivamente, bons produtores de ?-amilase e proteases, conseguiu-se aumentar os níveis de produção destas enzimas, através das técnicas de transformação e fusão de protoplastos. O melhoramento genético por transformação mostrou ser mais eficiente do que o realizado por fusão de protoplastos. Dos vários recombinantes isolados, obtidos por transformação, foram selecionadas as linhagens T-41 e T-39. A primeira, T-41, produziu duas vezes mais ?-amilase e três vezes mais proteases, enquanto que a segunda, T-39, produziu quatro vezes mais proteases, considerando-se o receptor B. amyloliquefaciens. Estudos comparativos demonstraram que a ? - amilase produzida pelo receptor apresentou atividade ótima, em pH 6,0 e temperatura ótima a 65°C. Na temperatura de 60°C a enzima foi estável por 60 minutos. Por outro lado, a enzima produzida pelo T-41 apresentou atividade ótima em pH 6,0 e temperatura ótima a 65°C. A 60°C a atividade amilásica começou a decrescer a partir de 40 minutos, com declínio acentuado a partir de 65°C. A análise do cromatograma evidenciou que as enzimas produzidas por essas linhagens apresentaram a mesma maneira de atuação sobre o amido.O recombinante T-41 mostrou ser mais susceptível a autólise celular do que o B. amyloliquefaciens. A atividade amilásica da linhagem F-52, obtida por fusão de protoplastos, foi o dobro da atividade do parental B. natto, e somente este recombinante desenvolveu a capacidade de crescer a 50°C

Abstract: Two different strains of Bacillus3 were used B. amyloliquefaciens ATCC 2342 and B. natto, isolated from the commercial product "Natto", good producer of ? -amylase and of proteases, respectively. The level of production of these enzymes was increased through technique using transformant...

Abstract: Two different strains of Bacillus3 were used B. amyloliquefaciens ATCC 2342 and B. natto, isolated from the commercial product "Natto", good producer of ? -amylase and of proteases, respectively. The level of production of these enzymes was increased through technique using transformant DNA and fusion of protoplasts. The genetic improvement by transformation was shown to be more eficient than that obtained by protoplast fusion. Among the various recombinant DNA's isolated and obtained by transformation, the T-41 and T-39 strains were selected. The former produced twice as much a-amylase and three times the quantity of proteases as the B. amyloliquefaciens, while the T-39 strain produced four times as much proteases as B. amyloliquefaciens. Comparative studies demonstrated that the a-amylase produced by the recipient had maximum activity at pH 6,0 and 65°C. At 60°C, the enzyme was stable for 60 minutes. Similarly, the enzyme produced by T-41 showed maximum activity at pH 6,0 and 65°C. At 60°C, the amylase activity began to decrease after 40 minutes, with a sharp decline in activity at 65°C. An analysis of the chromatogram indicated that the enzymes produced by these strains demonstrated the same type of activity on starch. The recombinant T-41 was shown to be more susceptible to cellular autolysis than B. amyloliquefaciens. The amylase activity of the F-52 strain, obtained by protoplast fusion, was twice that of the parent B. natto and only this recombinant developed the capacity to grow at 50°C