Orientador: Irene G. H. Lorand-Metze

Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas

Resumo: As regiões organizadoras de nucléolo - NORs - são alças de DNA responsáveis pela síntese de RNA ribossomal (RNAr) durante a interfase. Caracterizam-se pela presença de proteínas não histonas ligadas ao RNAr que se coram pela prata proteínas AgNORs - com grande especificidade permitindo,...

Resumo: As regiões organizadoras de nucléolo - NORs - são alças de DNA responsáveis pela síntese de RNA ribossomal (RNAr) durante a interfase. Caracterizam-se pela presença de proteínas não histonas ligadas ao RNAr que se coram pela prata proteínas AgNORs - com grande especificidade permitindo, desse modo, a localização e consequente observação das NORs durante o ciclo celular com relação a sua atividade e comportamento. À microscopia ótica podem ser visualizadas como pontos isolados ou agrupados em uma matriz proteica sendo então denominados "clusters". As AgNORs estão relacionadas à taxa de duplicação celular e vários estudos têm demonstrado que sua análise quantitativa é útil na distinção de neoplasias benigna.s e malignas bem como no prognóstico e estadiamento das últimas. Com o objetivo de estudarmos melhor a citocinética celular em L.M.C. analisamos as AgNOR em células da linhagem granulocítica de 43 sangues periféricos e 15 medulas ósseas de pacientes com LMC fase crônica, 16 sangues periféricos de pacientes com LMC em crise blástica e 20 medulas ósseas de pacientes controles. Observamos que os padrões de "clusters" e pontos em LMC foram semelhantes entre sangue periférico e medula óssea de um mesmo caso, permitindo a comparação entre vários grupos. Observamos também que existe um padrão característico de "clusters" e pontos para cada tipo celular da granulopoiese. O número de "clusters" de mieloblastos do grupo controle mostrou-se significativamente maior do que nos casos de LMC analisados ao diagnóstico. O número de pontos mostrou-se semelhante em mieloblastos, porém significativamente menor em promielócitos e mielócitos dos pacientes com LMC fase crônica ao diagnóstico, quando comparados com o grupo controle. (Tabela 11). No grupo com LMC fase crônica os casos analisados ao diagnóstico mostraram número significativamente maior de clusters em mieloblastos quando comparados com os em recaída já tratados e em crise blástica. Os dados obtidos sugerem ser a evolução da doença a responsável pela diminuição do número de clusters. Porém estes dois últimos grupos não diferiram entre si com relação ao número de clusters. O número de pontos mostrou-se semelhante nos mieloblastos dos três grupos estudados.

Abstract: The nucleolar organizer regions (NORs) are loops of DNA, that are responsible for the syntesis of the ribossomal RNA. A special silver-staining technique identifies the acidic non-histones proteins (AgNORs) associated with the sites of r RNA transcription, such as RNA polymerase I, C23 and...

Abstract: The nucleolar organizer regions (NORs) are loops of DNA, that are responsible for the syntesis of the ribossomal RNA. A special silver-staining technique identifies the acidic non-histones proteins (AgNORs) associated with the sites of r RNA transcription, such as RNA polymerase I, C23 and 823 proteins. This method has been widely used for the observation of the NORs during the cell cycle in different normal and pathologic lesions. The AgNORs show different patterns in interphase nuclei: 1 - solitary rounded argyrophilic structures corresponding to a small nucleolus in resting cells, 2 - clusters of NORs within a matrix, corresponding to nucleoli, 3 - small dots (true AgNORs) scattered throughout the nucleoplasm. The pattern of AgNORs is related to the duplication rate and to maturation stage of cells. Several studies have demonstred that its analysis is usefull in distinguishing benign from malignant lesions and for the grading of tumors. We have analysed the pattern of AgNORs of granulopoietic cells in chronic myeloid leukemia (CML) and compared it to the normal granulopoiesis. The peripheral blood cells of 24 cases of CML in chronic phase at diagnosis, 19 cases with relapse of chronic phase and 16 cases in blast crisis were studied. On the other hand, the granulopoiesis in bone marrow of 15 cases of CML at diagnosis was compared to 20 cases of normal bone marrow. The pattern of AgNORs was similar in the peripheral blood and bone marrow in all granulopoietic precursors of the same maturation stage, in CML at diagnoses. As in the normal bone marrow, the granulopoietic precursors of CML in chronic phase, revealed a characteristic pattern of clusters and dots for the cells in each maturation stage. Compared to normal granulopoiesis only the myeloblasts of CML in chronic phase at diagnosis had significantly less clusters. The dots however showed a similar number in blasts, matamyelocytes, band forms and segmented neutrophils. They were less numerous in promyelocytes and myelocytes. The blasts of CML at diagnoses showed significantly more clusters than those at relapse afier treatment of chronic phase. These, however, had a similar pattern of AgNORs than that seen in blast crisis. The number of clusters wich are only present in proliferative cells is inversely related to cell cycle duration. The number of dots increases with cell maturation in proliferating cells and decreases again after the stop of proliferative activity. In view of these data the analysis of the pattern of AgNORs in CML discloses the discordant maturation described in this disease. On the other hand the number of clusters of blast crisis in CML is lower than in normal myeloblasts and keeps decreasing continuously during the course of the disease. This pattern is similar to that describedin acute myeloid leukemia.