Orientador : Vanderlei Perez Canhos

Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos

Resumo: Foi efetuado um estudo taxômico de 15 isolados entomopatogênicos de mostras de solos e insetos do Brasil com características de bactérias aeróbias, formadoras de endosporos e presença de cristal. Treze isolados acarretaram 100 % de mortalidade a larvas de Aedes fluviatilis em leituras...

Resumo: Foi efetuado um estudo taxômico de 15 isolados entomopatogênicos de mostras de solos e insetos do Brasil com características de bactérias aeróbias, formadoras de endosporos e presença de cristal. Treze isolados acarretaram 100 % de mortalidade a larvas de Aedes fluviatilis em leituras observadas a 24 h. Os resultados dos testes de caracterização morfológica, bioquímica e fisiológica indicaram que 14 isolados pertencem a espécie Bacillus thuringiensis (B.t.) enquanto que o 15° foi determinado como Bacillus sphaericus (B.s.). Através dos perfis eletroforéticos de proteínas totais 11 B.t. isolados foram identificados como subespécie israelensis (sorotipo H-14, incluindo duas linhagens não sorotipadas), 1 como kurstaki (soro tipo H3a, 3b) e 1 como morT!isoni (sorotipo H8a, 8b). As linhagens de B. thuringiensis subsp. israelensis (B.t.i.) formaram um grupo homogêneo distinto das linhagens de referências tóxicas. a lepidópteros e coleópteros. O isolado identificado como B. sphaericus demonstrou alta similaridade com a linhagem 2362 através de testes de atividade larVicida; fagotipagem (fagotipo 3) e sorologia (H5). Os 11 isolados identificados como B.t.i. pela sorologia e/ou perfIS eletroforéticos de proteínas totais não apresentaram polimorflsmo quanto aos fragmentos de restrição, quando foram utilizadas sondas do gene 16S rRNA e do cristal de B.t.i.. A sonda do gene toxigêniro de B.t.i. demonstrou ser bastante específica para a subespécie israelensis, não apresentando hibridizaçóes Com outras subespécies. O gene do cristal de B.t.i. de referência IPS82 e isolados identificados como B.t.i. foram amplificados através da reação em cadeia da polimerase (PCR), digeridos com Sau3AI e separados por eletroforese. Os perfis de restrição destes fragmentos foram idênticos. Esses resultados indicam que os B.t.i. isolados no Brasil formam uni grupo. homogêneo e de organização genética bastante conservada. Outras 28 linhagens de referência representando 12 subespécies de B.t. com 9 sorotipos diferentes, 4 B. cereus e 4 B. anthracis foram incluídas na análise do perfil de hibridização com o gene 16S rRNA Os dados obtidos mostraram correspondência com os testes de sorologia (DE BARJAC & FRACHON, 1990) e a taxonomia numérica (PRIEST et ai., 1988)

Abstract: Fifteen bacterial isolates from Brazilian soil and insects with aerobic, endospores and crystal characteristics were taxonomically analysed. Thirteen strains were shown to be pathogenic to Aedes fluviatilis larvae causing 100 % mortality in 24 hours and two strains were non-pathogenic. The...

Abstract: Fifteen bacterial isolates from Brazilian soil and insects with aerobic, endospores and crystal characteristics were taxonomically analysed. Thirteen strains were shown to be pathogenic to Aedes fluviatilis larvae causing 100 % mortality in 24 hours and two strains were non-pathogenic. The results of morphological, biochemical and physiological tests indicated that 14 strains belong B. thuringiensis (8.t.) while the remaining strain was identified as B. sphaericus. Electrophoresis ofwhole celI protein patterns helped in the identification of eleven isolates as israelensis (serotype H-14, including two non-serotypable strains), 1 as kurstaki (serotype H3a, 3b) and 1 as morrisoni (serotype H8a, 8b). Moreover, it was shown that alI B. thuringiensis subsp. israelensis (8.t.i.) strains. formed a homogenous group distinct from reference strains toxic for Lepidoptera or Coleoptera. The isolate identified as B. sphaericus presented high similarity with strain 2362 by larvicidal tests, phagotyping (group 3) and serotyping (H5). The is.olates identified as subspecies israelensis by serology and/or electrophoresis of whole cell proteins patterns showed the same patterns using restriction fragments length polymorphisms (RFLPs) analysis with the 16S rRNA and the crystal gene of B.t.i. as probes. The crystal gene of B.t.i. used as the probe was specific only to the subspecies israelensis. The crystal gene of B.t.i. reference (IPS82) and isolated strains of B.t.i. were amplified by Polymerase Chain Reaction (PCR), digested with Sau3AI and electrophoresed in agarose gel. The restriction fragment patterns obtained were identical. It confirmed as stated above that the B.t.i. isolates used in this study are a highly homogenous group with a conserva tive. genetic organization. Furthermore, 28B.t. reference strains representing 12 subspecies (with 9 different serotypes), 4 B. cereus and 4. B. anthracis were compared with regard to their ribosomal RNA gene restriction patterns. The results obtained match the serological tests (DEBARJAC & FRACHON, 1990) and numerical taxonomy studies (PRIEST et al., 1988). The results in this study suggest that the techniques could be an altemative to serological tests