Orientador: Maria Luiza Silveira Mello

Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia

Resumo: A concentração crítica de eletrólitos (CEC) da <' cromatina, considerada corno a concentração salina na qual o fenômeno de metacromasia é abolido, numa situação em que se emprega azul de toluidina corno corante catiônico e íons Mg2+ corno cátions inorgânicos, foi determinada em cromossomos...

Resumo: A concentração crítica de eletrólitos (CEC) da <' cromatina, considerada corno a concentração salina na qual o fenômeno de metacromasia é abolido, numa situação em que se emprega azul de toluidina corno corante catiônico e íons Mg2+ corno cátions inorgânicos, foi determinada em cromossomos politênicos de glândulas salivares do sciarídeo Trichosia pubescens, nas fases Ls, L7 e P1 do desenvolvimento larval. O objetivo era determinar se os valores de CEC variavam em áreas cromossômicas com diferente supra-estrutura e/ou composição nucleoprotéica. Constatou-se que a maioria das regiões cromossômicas em preparados fixados em etanol-ácido acético atingiram a CEC na concentração de MgCl2 O .10M e que sítios cromossômicos ricos em ribonucleoproteínas e/ ou pufes de RNA Edna exibiram valores superiores de CEC. Não foi detectado um padrão único de mudanças em valores de CEC ao longo da pufação, sugerindo-se complexidade e variações funcionais para tais pufes. As regiões heterocromáticas e/ ou sub-replicadas também tiveram valores de CEC superiores a O.10M devido aos seus diferentes níveis de condensação cromatínica, ou ao processo de síntese não sincronizada de DNA em comparação a outras regiões dos cromossomos. Os valores de CEC em cromossomos tratados com RNase foi mais elevado em decorrência da re-estruturação dos complexos nucleoprotéicos ou não formação de híbridos de DNA-RNA. O valor de CEC em cromossomos fixados em paraformaldeído foi superior aqueles obtidos nos preparados fixados em etanol-ácido acético (3: 1) , certamente devido ao diferente nível de preservação de proteínas promovido por estes fixadores. ­Numa variante do método de CEC, proposta para evidenciação de complexos ribonucleoprotéicos, a concentração de O.O5M de MgCl2 não foi ideal para cromossomos politênicos de Trichosia pubescens, diferindo de resultados já reportados para cromossomos politênicos de Drosophila aracataca. Micronucléolos distribuídos ao longo dos cromossomos ou dispersos no nucleoplasma, tiveram valores de CEC superiores em relação aos da maioria das regiões cromossômicas. Estes valores decresceram após tratamento com RNase, demonstrando que o RNA é o principal componente acontribuir com sítios de ligação às moléculas de azul de toluidina nessa estrutura

Abstract: The critical electrolyte u concentration (CEC) of chromatin, measured as the saline concentration which metachromasy is abolished, when employing toluidine blue as a cationic dye and Mg2_ ions as inorganic cations, was determined for the polytene chromosomes of salivary glands of the...

Abstract: The critical electrolyte u concentration (CEC) of chromatin, measured as the saline concentration which metachromasy is abolished, when employing toluidine blue as a cationic dye and Mg2_ ions as inorganic cations, was determined for the polytene chromosomes of salivary glands of the sciarid Trichosia pubescens. The Ls, L7 and P1 phases of larval development were studied. The objective was to determine the CEC values for various chromosome areas with different supra-structure and/or nucleoprotein composition. Most of the chromosome regions in preparations fixed with acetic acid-ethanol (1:3) attained the CEC concentration of O.10M MgCl2. Areas rich in ribonucleoprotein (RNP) and/or RNA and DNA puffs displayed high CEC values. A singular regular pattern of CEC values was not detected during puff development which, suggests the complexity and variable functions to these puffs. Heterochromatic and/or sub-replicated regions had CEC values above O.10M due to their different levels of chromatin condensation, or to the non synchronized process of DNA syntheses in comparison with the other chromosome regions. The CEC value of chromosomes treatmented with RNase was higher as aresult of the re-organization of nucleoprotein complexes or the non formation of DNA-RNA hybrids. The CEC value of paraformaldehyde fixed chromosomes was higher than that attained in the acetic acid-ethanol (1:3) fixed preparations, clearly due to the different levels of protein preparation confired by these fixatires '.' In a variant of the CEC method, proposed to evidentify nucleoprotein complexes, the concentration of O.O5M MgC12 was not ideal for polytene chromosomes of Trichosia pubescens, which differs form results already reported for Drosophila aracataca polytene chromosomes. Micronucleoli distributed along of the chromosomes or dispersed in the nucleoplasm had higher CEC values in relation to most of the chromosome regions. These values decrease after Rnase treatment, demonstrating that RNA is the principal component which contributes binding sites for toluidine blue molecules in this structure