Orientador: Luiz Gonzaga Santoro

Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia

Resumo: Sementes de Phaseolus vulgaris de 3 cultivares (Aeté-3, Goiano precoce e Carioca) foram analisadas sob diferentes aspectos: concentração das diferentes frações proteicas de albuminas e de globulinas, padrões eletroforéticos, composição de aminoácidos, avaliação do pI das principais vicilinas...

Resumo: Sementes de Phaseolus vulgaris de 3 cultivares (Aeté-3, Goiano precoce e Carioca) foram analisadas sob diferentes aspectos: concentração das diferentes frações proteicas de albuminas e de globulinas, padrões eletroforéticos, composição de aminoácidos, avaliação do pI das principais vicilinas e seus valores nutritivos. A principal proteína de reserva, a faseolina, ainda, foi analisada em seu grau de glicosilação, conteúdo de carboidratos e padrão de degradação enzimático in vitro. Vários métodos foram utilizados para extraçâo, separação, análise e dosagem das diferentes frações proteicas, tais como, precipitação com tampões, sais e pH diferenciais, diálise, cromatografias (exclusão, afinidade e líquida). eletroforese denaturante, densitometria, reações enzimáticas, colorimétricas e imunológicas. Aeté e Carioca demonstraram ser cultivares muito semelhantes, pois mostraram o mesmo padrão eletroforético de albuminas e globulinas e a mesma concentração destas proteínas, de lectinas e de leguminas. A faseolina desses cultivares apresentou uma subunidade maior e outras 3 menores na proporção de 5:2:1:2. Apresentaram sementes pequenas, sendo classificados como tipo "Sanilac". Eles são filogeneticamente mais próximos, com características bastante distintas de Goiano. Contudo, o conteúdo de Lys e carboidratos ligados à faseolina foi bem superior em Carioca em relação aos demais cultivares. Goiano, por sua vez, mostrou um padrão eletroforético bem diferente dos outros cultivares, onde a faseolina era constituída de 2 subunidades maiores e 2 menores, na proporção de 2:2:1:0,1, apresentando sementes grandes, por isso sendo classificado como tipo "Contender". Além disso, diferiu na concentraçâo de lectinas e leguminas. Apresentou um maior conteúdo de carboidratos que Aeté e maior quantidade de Met e Cys que os demais cultivares. Todas as subunidades da faseolina e as leguminas dos 3 cultivares mostraram ser glicosiladas, embora o grau de glicosilaçâo tenha se distribuído indistintamente. Quanto à degradação, semelhante também nos 3 cultivares, verificou-se que a faseolina foi prontamente hidrolisada pela tripsina, que agiu na porção central das subunidades, formando polipeptídeos com M.M. ao redor de 20 kg/mol. A subunidade Q' pareceu ser a primeira a ser quebrada e, em Goiano, ela provavelmente também foi degradada no C-terminal. A faseolina de Goiano foi mais resistente ao ataque pela tripsina do que aquelas de Aeté e Carioca. Um aspecto comum entre os 3 cultivares, principalmente no que diz respeito à faseolina, foi a verificação da presença de determinantes antigênicos comuns, pois o anticorpo produzido contra a fração de proteínas totais de Goiano reconheceu aquelas de Aeté e Carioca. Há características que indicam que Goiano seria o cultivar potencialmente mais nutritivo, como o alto conteúdo de aminoácidos sulfurados e de Lys e a menor concentração de compostos hemoaglutinantes

Abstract: Seeds of Phaseolus vulgaris cv. Aeté-3, Coiano precoce and Carioca were analysed in different aspects: contents of the different protein fractions of albumins and globulins, electrophoretic banding patterns, amino acid composition, evaluation of the range of precipitaiton of major...

Abstract: Seeds of Phaseolus vulgaris cv. Aeté-3, Coiano precoce and Carioca were analysed in different aspects: contents of the different protein fractions of albumins and globulins, electrophoretic banding patterns, amino acid composition, evaluation of the range of precipitaiton of major vicilins, and their nutritional values. The degree of glycosilation, carboydrate content and in vitro enzymatic hydrolysis patterns were also analysed for faseolin. Several methods were used for the extraction, separation and analysis of the different protein fractions, e.g. precipitation using buffers; salts and differencial pH; dialysis; exclusion, affinity and liquid chromatography; SDS-PACE; densitometry; enzymatic, colorimetric and immunological reactions. The cultivars Aeté and Carioca were found to be similar in electrophoretic patterns and contents of albumins, globulins, lectins and legumins. The patterns of faseolin of these cultivars were identical, having one major and three minor bands in a proportion of 5:2: 1:2. They presented small seeds and were classified as "Sanilac". They are phylogeneticaly very similar but unlike Coiano. However, Lys and carboydrates of faseolin were higher in Carioca than the others. Coiano showed a very different electrophoretic pattern of faseolin, having two major bands in a proportion of 2:2:1:0,1, with bigger seeds than the others. Coiano had a pattern similar to "Contender". It was also different in lectin and legumin contents. It presented a higher carboydrate content than Aeté and higher Met and Cys levels than the others. All subunits of faseolin and the protein like-Iegumin of Aeté, Coiano and Carioca were glycosylated but the degree of glycosilation was indistinct. Faseolin of the three cultivars was hydrolysated by trypsin that acts in the central portion of the molecule, producing polypeptides with M

s. around 20 kgfmol. The a subunit seemed the first to be degraded and in the case of Coiano. this subunit was hydrolysed at the carboxyl end, too. Faseolin from Coiano was more resistant to proteolytic attack than the others of Aeté and Carioca. The presence oí common antigenic determinants of...

s. around 20 kgfmol. The a subunit seemed the first to be degraded and in the case of Coiano. this subunit was hydrolysed at the carboxyl end, too. Faseolin from Coiano was more resistant to proteolytic attack than the others of Aeté and Carioca. The presence oí common antigenic determinants of faseolin between Aeté. Coiano and Carioca was determined. Some aspects like the high sulfur amino acids and Lys and the low hemoaglutin activity (lectins) suggest that Coiano might have a higher nutritional potencial than Aeté and Carioca