Tese (livre docencia) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia

Resumo: Este trabalho contem alguns estudos fisico-quimicos de DNA polimerases dependentes, de RNA. Poliaminas, em presença de Mg2+, exercem um efeito ativador nas reações catalisadas por transcripta-se reversa de virus de mieloblastose de aves, mas não por DNA polimerase a de Xenopus laevis. ...

Resumo: Este trabalho contem alguns estudos fisico-quimicos de DNA polimerases dependentes, de RNA. Poliaminas, em presença de Mg2+, exercem um efeito ativador nas reações catalisadas por transcripta-se reversa de virus de mieloblastose de aves, mas não por DNA polimerase a de Xenopus laevis. Derivados de nucleotídeos e polinucleotídeos foram descritos como substratos e inibidores de transcriptase reversa. dCflTP pode ser incorporado parcialmente no DNA sintetisadqo por transcriptase reversa e por DNA polimerases celulares a e ?. Análogos de poli A e poli C, com substituintes 2'-fluor e 2'-O-metil, podem ser utilizados como matrizes de síntese de DNA catalisada por transcriptase reversa, em presença de Mg2+ ou Mn2+. O papel do Mn2+ na síntese de DNA e discutido neste trabalho. Diferentes compostos foram utilizados como inibidores de sintese de DNA. O antibiótico novobiocina diminui a formação do complexo entre Trp transcriptase reversa e o tRNA iniciador, ligando-se irreversivelmente à enzima. (dCfl)n é um inibidor de transcriptase reversa utilizando-se DNA ativado ou RNA 70 S como matrizes naturais e (dA)n ou (rA)n como matrizes sintéticas. Nas mesmas condições nenhum efeito é verificado nas reações catalisadas por DNA polimerase a . As reações de transcriptase reversa em presença de (dAfl)n.(dT)12 como matriz-iniciador são resistentes à ação de (dCfl)n e de outros polinucleotídeos inibidores como (rU)n e (rI)n. Entretanto, tais reações são inibidas por outros compostos como brometo de etideo, tetrametil brometo de etídeo, berenil e N-etilmaleiimida. DNA polimerase A de gérmen de trigo apresenta características de uma DNA polimerase dependente de RNA. Como a transcriptase reversa, a DNA polimerase A reconhece (rA)n com uma eficiência maior em presença de Mg2+, e é inibida por glicerol e actinomicina D. O reconhecimento de matrizes naturais do tipo RNA somente se verifica utilizando-se desoxinucleosídeos trifosfato de alta atividade específica. O processo do reverso da transcrição pode ser observado também em virus de DNA. DNA polimerases purificadas de folhas infectadas pelo vírus do mosaico da couve-flor reconhecera com eficiência (rA)n, (rC)n, (Cm)n como matrizes sintéticas; são resistentes à ação de afidicolina e são inibidas por brometo de etídeo.

Abstract: This work reports some physico-chemical studies on the RNA-dependent DNA polymerase. In the presence of Mg2+, poliamines have an activating effect on the reactions catalyzed by avian myeloblastosis virus reverse transcriptase, but not on those catllyzed by Xenopus laevis DNA polymerase a....

Abstract: This work reports some physico-chemical studies on the RNA-dependent DNA polymerase. In the presence of Mg2+, poliamines have an activating effect on the reactions catalyzed by avian myeloblastosis virus reverse transcriptase, but not on those catllyzed by Xenopus laevis DNA polymerase a. Derivatives of nucleotides and polynucleotides have been described as substrates or inhibitors of reverse transcriptase. dCflTP could be partially incorporated in the DNA synthesized by reverse transcriptase and by cellular DNA polymerases a and ?. Poly A and poly C analogues, with 2'-fluoro and 2'-O-methyl as substituents, could be utilized as templates for the DNA synthesis catalyzed by reverse transcriptase, in the presence of Mg2+ or Mn2+, The role of Mn2+ on the DNA synthesis is discussed in this work. The antibiotic novobiocin reduces the complex formation between reverse transcriptase and the Trp primer tRNA binding irreversibly to the enzyme. It has been observed that (dCfl)n was an inhibitor of reverse transcriptase by using activated DNA or 70 S RNA as natural templates and (dA)n or (rA)n as synthetic templates. At the same conditions no effect was verified on the reactions catalyzed by DNA polymerase a. Reverse transcriptase reactions directed by (dAf1)n.(dT)12 as template-primer are resistant to (dCfl)n and to other inhibitor polynucleotides like (rU)n and (rI)n. However, these reactions were inhibited by other compounds like ethidium bromide, tetramethyl ethidium bromide, berenil and N-ethylmaleimide. Wheat germ DNA polymerase A has shown some RNA-dependent DNA polymerase characteristics. Like reverse transcriptase, DNA polymerase A could recognize (rA)n better in the presence of Mg2+ and was inhibited by glycerol and actinomycin D. RNA natural templates could be copied only when high specific activity deoxy-nucleoside triphosphate was used. The reverse of the transcription can also be observed in DNA virus. Synthetic templates like (rA)n, (rC)n, (Cm)n were efficiently recognized by DNA polymerases purified from cauliflower mosaic virus infected leaves; it has been observed that these enzymes were resistant to aphidicolin and inhibited by ethidium bromide.