Orientador : Q. S. Tahin

Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia

Resumo: A preparação da particula 'F IND. 1¿ dos anfíbios estudados, foi possível a partir de preparação das mitocôndrias hepáticas solubilização da partícula 'F IND. 1¿ e purificação através de uma coluna de afinidade obtivemos uma purificação de 14-15 vezes e uma recuperação de 70-80%. O...

Resumo: A preparação da particula 'F IND. 1¿ dos anfíbios estudados, foi possível a partir de preparação das mitocôndrias hepáticas solubilização da partícula 'F IND. 1¿ e purificação através de uma coluna de afinidade obtivemos uma purificação de 14-15 vezes e uma recuperação de 70-80%. O rompimento das mitocôndrias e consequente solubilização das partículas 'F IND. 1¿ foram acompanhadas através de microscopia eletrônica. Estudos sobre efeito do pH sobre a atividade enzimática, mostraram que a atividade da enzima se mantém mais ou menos constante em valores de pH entre 7,6 e 9,0. A ação inibitória de baixas temperaturas foi verificada, chegando a enzima a perder 70 a 80% de sua atividade quando deixada à temperatura a '4GRAUS¿C durante 1 hora. A importância do 'Mg POT. 2+¿ ficou tembém evidenciada para a partícula 'F IND. 1¿ de mitocôndrias hepáticas dos anfíbios estudados, sendo que a concentração de 'Mg POT. 2+¿ que melhor favoreceu a atividade enzimática foi 6mM, enquanto concentração de ATP mais favorável dói 8mM. Experimentos em que se analisou a variação da atividade específica da 'F IND. 1¿ em função de variadas proporções ATP/Mg, mostraram que a proporção ATP/Mg que proporciona maior atividade específica entre 1 e 2, enquanto ATP ou 'Mg IND. 2+¿ livre no meio de incubação causava inibição das atividades enzimática ...Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital

Abstract: A preparation of the 'F IND. 1¿ particle of various amphibians, was possible beginning with hepatic mitochondria, solubilizing and purifying the 'F IND. 1¿ particle by passing it through on affinity column (AH- sepharose ¿4B). Considering the affinity column step, we obtained a...

Abstract: A preparation of the 'F IND. 1¿ particle of various amphibians, was possible beginning with hepatic mitochondria, solubilizing and purifying the 'F IND. 1¿ particle by passing it through on affinity column (AH- sepharose ¿4B). Considering the affinity column step, we obtained a purification of 14-15 times and a possible recuperation of 70-80% for a single purification process. The rupture of the mitochondria and solubilization of the 'F IND. 1¿ particles were observed with the electron microscope. Comparing the enzymatic and the pH, the enzymatic activity was found to maintain constant for the interval of pH 7,6 to 9,0. the inhibiting effect of low temperature was investigated, attaining a loss of enzymatic activity of 70 to 80% when kept at a temperature of '4 GRAUS¿C for 1 hour. The presence of 'Mg POT. 2+¿ was also shown to be important for the activity of the 'F IND. 1¿ particle of amphibian hepatic mitochondria. The most favorable concentration of 'Mg POT. 2+¿ was established to be 6mM, while the most favorable concentration of ATP was 8mM. Experiments analising the specific activity of 'F IND. 1¿ in relation to various proportions of ATP/ Mg demonstrated greater specific activity between 1 and 2, while ATP or free 'Mg POT. 2+¿ in the incubation medium inhibited enzymatic activity ...Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations