Orientador : Octavio Henrique de Oliveira Pavan

Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia

Resumo: Com base nos resultados obtidos no presente trabalho, conc1uiu-se que:
a)Apesar da diferença de origem quanto ao hospedeiro, o VPNAgP, VPNAgF10, VPNTnP, VPNTnF11 e o VGDs, mostraram comportamento biológico muito semelhante em larvas de D. saccharalis.
b)Os experimentos in vitro de...

Resumo: Com base nos resultados obtidos no presente trabalho, conc1uiu-se que:
a)Apesar da diferença de origem quanto ao hospedeiro, o VPNAgP, VPNAgF10, VPNTnP, VPNTnF11 e o VGDs, mostraram comportamento biológico muito semelhante em larvas de D. saccharalis.
b)Os experimentos in vitro de estabilidade térmica do VPNAgP, VPNAgF10, VPNTnP, VPNTnF11 e VGDs, demonstraram que: os 5 baculovirus foram completamente inativados em temperaturas de 100ºC, 80ºC e 70ºC; em menos de cinco, dez e trinta minutos respectivamente.
Os 5 virus foram capazes de resistir mantendo a infectividade por 2 horas a temperaturas de 60ºC, por 1 dia a 50QC e por até 5 dias a temperaturas de 40ºC.
c)Os experimentos in vivo dos efeitos de diferentes temperaturas no desenvolvimento da infecção viral com o VPNAgP, VPNAgF10, VPNTnP e VPNTnF11 em larvas de D. saccharalis, revelaram que:
Os 4 baculovirus se desenvolveram normalmente na faixa de temperatura de 17ºC a 39ºC em larvas de D. saccharalis.Para os 4 Virus de Poliedrose Nuclear, a temperatura de 39ºC foi onde ocorreu a menor produção viral.A temperatura ótima foi a ele 28ºC, onde ocorreu a maior produção viral em D. saccharalis, para os 4 virus testados.Com um aumento de 2ºC da temperatura ótima (30ºC), o VPNAgP, VPNAgF10,VPNTnP e o VPNTnF11 apresentaram uma redução na produção viral de 461%, 279%, 139% e 192%, respectivamente.
Uma diminuição de 2ºC da temperatura ótima (26ºC), também causou uma redução na producão viral do VPNAgP, VPNAgF10, VPNTnP e o VPNTnF1,os quais respectivamente mostraram uma redução de 107%, 456%, 121% e 383%.
d)A inoculação prévia dos 5 virus inativados, inibiu parcialmente o desenvolvimento da infecção dos mesmos quando inoculados 5 dias mais tarde em D. saccharalis.
e)Na continuação da passagem seriada dos isolados selecionados, VPNAgF10 e VPNTnF11, constatou-se que: Tanto o VPNAg como o VPNTn foram capazes de infectar e multiplicar-se no hospedeiro alternativo, D. saccharalis. Após vinte passagens seriadas, o isolado F20 do VPNAg mostrou uma redução no valor de DL50 de 1500 vezes para D.saccharalis, quando comparado com o virus original obtido de larvas de A. gemmatalis.O isolado F11 de VPNTn, o qual mostrou uma redução no valor de DL50 de 800 vezes após 11 passagens seriadas em D. saccharalis, quando comparado com o virus original obtido de larvas de T. ni, não mais apresentou alteração a partir da 12º passagem seriada. Os poliedros ou cristais do VPNAg e do VPNTn não apresentaram qualquer modificação no decorrer das passagens seriadas, em D. saccharalis.
A análise protéica dos isolados selecionados do VPNAg (F10 F15 e F20) não mostrou diferenças quando comparado com o virus original obtido de larvas de A. gemmatalis.O VPNAgP e os isolados VPNAgF10 VPNAgF15 e VPNAgF20 apresentaram 18 bandas polipeptídicas, cujos pesos moleculares variaram entre 15000 a 92000 daltons.O VPNTnP e o isolado selecionado VPNTnF20 não apresentaram diferenças quanto a seus polipeptídeos quando analisados em gel de SDS e poliacrilamida.
O VPNTnP e o isolado selecionado VPNTnF20 exibiram 22 bandas polipeptídicas, cujos pesos moleculares variaram de 11000 a 135000 daltons.
Tanto o VPNAg como o VPNTn e os seus isolados apresentaram o mesmo peso molecular de 28000 daltons para a poliedrina.A passagem seriada em um hospedeiro alternativo é um método eficiente para indução de alterações genéticas nos vírus de Poliedrose Nuclear (VPNs)

Abstract: Based on the results obtained in the present work we were able to conclude:
a)Despite the different original hosts and different strains the AgNPV, AgNPVF10 TnNPV, TnNPVF11 and DsGV all exhibited the same general infection pattern in D. saccharalis, the sugarcane borer.
b)The tests of...

Abstract: Based on the results obtained in the present work we were able to conclude:
a)Despite the different original hosts and different strains the AgNPV, AgNPVF10 TnNPV, TnNPVF11 and DsGV all exhibited the same general infection pattern in D. saccharalis, the sugarcane borer.
b)The tests of thermal stability for these virus show that all five baculovirus were completely inactivated when exposed to temperatures of 100ºC, 80ºC and 70ºC in less than five, ten and thirty minutes respectively. All these virus stil1 retained infectivity for 2 hours when exposed to a temperature of 60ºC, for 24 hours at 50ºC and up to 5 days at 40ºC.
c)The effect of temperature of the virus development in D. saccharalis was analysed for the AgNPV, AgNPVF10 TnNPV and TnNPVF11 and showed that: All four virus were able to develop normally in temperatures ranging from 17ºC to 39ºC exhibiting development of polyhedra.The greatest reduction in the number of polyhedra produced was observed at 39ºC. The optimal temperature for polyhedral production was 28ºC for all virus.An increase in the optimal temperature of 2ºC (30ºC) caused a reduction on the viral production of 461, 279, 139 and 192% for the AgNPV, AgNPVF10 TnNPV and TnNPVF11 respectively.The viral production at 2ºC below the optimal temperature (26ºC) also was drastically reduced; this reduction being respectively of 107, 456, 121 and 383% when compared to the production at 28ºC.
d)A previous inoculation of the 5 heat-inactivated virus caused a partial inhibition of the infection when active virus was inoculated 5 days after the first treatment in D. saccharalis.
e) The continuation of the serial passage on the AgNPVF10 and TnNPVF11 strains resulted in the following observations:
No significant alterations were observed in the infection process and polyhedral formation of either virus.The F20 strain of AgNPV after 20 passages through D.saccharal showed a 1500 fold reduction in the LD50 value for the D. saccharalis larvae, when compared with the original inoculum obtained from Anticarsia gemmatalis larvae.The Fll strain of the TnNPV which showed a 800 fold reduction after 11 passages through D. saccharallis when compared to the original inoculum obtained from Trichoplusia ni showed no alteration on passages 12 through 20 in D. saccharalis.The protein analysis of the selected strains of AgNPV showed no differences when compared to the original inoculum obtained from A. gemmatalis.The SDS-PAGE pattern exhibited 18 polypeptide bands with the molecular weight ranging from 15 to 92 K daltons.The protein analysis comparing TnNPV and TnNPVF20 strain showed identical patterns.The SDS-PAGE pattern showed 22 popypeptide bands with the molecular weight ranging from 11 to 135 k daltons.The main protein component of the Nuclear Poolyhedrosis Virus, polyedrin showed for all the strain of both virus the same molecular weight of 28k daltons.The serial passage in an alternate-host has shown to be an efficient method for inducing directed genetic alterations in these NPVs