Orientador : Fumio Yokoya

Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos

Resumo: Foi conduzido um estudo sobre o efeito do brometo de cetiltrimetilamônio (CTAB) em células de Acetobacter acetit A. pasistirianiis, Escheri chia colí, Klebsiella terrigena, Leuconostoc mesenteroides, Lactobacillus fermentuitij Alcaligenes faecalis, Pseudomonas aeruçinosa. Ps. cepacia, Ps....

Resumo: Foi conduzido um estudo sobre o efeito do brometo de cetiltrimetilamônio (CTAB) em células de Acetobacter acetit A. pasistirianiis, Escheri chia colí, Klebsiella terrigena, Leuconostoc mesenteroides, Lactobacillus fermentuitij Alcaligenes faecalis, Pseudomonas aeruçinosa. Ps. cepacia, Ps. mendocina, Ps. acidovoravs e Saccharomyces cersvisiae, com o intuito de esclarecer os mecanismos através cos quais este agente atua como substância antimicrobiana. Avaliou-se seu efeito no crescimento e metabolismo celular, bem como a influência da forma química do composto no seu modo de ação. A concentração micelar critica (c.m.c.) do CTAB em meio de cultura é menor do que em água, e em concentrações abaixo da c.m.c. o CTAB interage coro as proteínas do meio de cultura. Verificou-se que tanto a forma micelar como a monomérica apresentam ação antibacteriana. A formulação de meio de cultura mostrou que altas concentrações de magnésio são responsáveis pela longa duração da fase de latência e que Klebsiella terrigena, representante da família Enterobacteriacea mostrou-se pouco exigente quanto aos requerimentos nutricionais, porém, as espécies de Acetobacter não apresentaram comportamento semelhante. A concentração de CTAB necessária para causar inibição do crescimento varia de microrganismo para microrganismo, bem como com o meio de cultura empregado. No caso dos membros do gênero Acetobacter f independente do meio de cultura, a inibição do crescimento ocorreu em concentrações abaixo da c.m.c.. Para os membros da família Enterobacteriaceae a inibição do crescimento em meio CANA 11 ocorreu acima da c.m.c., enquanto que em Caldo Nutriente ocorreu abaixo desta. Pseudomonas aeruginosa, Ps. cepacia e Ps, mendocina apresentaram-se muito resistentes ao CTAB, o que não ocorreu com Ps, acidovorans. O CTAB inibiu o metabolismo: glícólise, respiração e fermentação esr. concentrações menores do que as necessárias para a inibição do crescimento. Inibiu também a atividade da. lactato desidrogenase e da álcool desidrogenase intracelular de todos os microrganismos testados, embora nas células resistentes, as enzimas tenham sido inibidas somente após lise celular. A lise de protop 1 astos induzida por CT AB é a fase terminal da uma série de eventos que se inicia pela desorganização da membrana, porém não foi verificada solubilizaçâo da membrana. A parede celular protege a. célula de lise, uma vez que células intactas não sofreram lise com as concentrações que causaram lise de protoplastos. As células resistentes ao CTAB, Pseudomonas aeruginosa, Ps. cepacia e Ps, mendocina apresentaram perfil de proteínas de membrana e de proteínas do citosol idêntico, quando cultivadas na presença e na ausência de CTAB. Por outro lado, as células de Escherichia coli, Klebsiella terrígena e Pseudomonas acidovorans apresentaram diferenças tanto no perfil de proteínas de membrana, como no perfil de proteínas do citosol. Observações microscópicas revelaram cue as células de Escherichia coli cultivadas na presença de CTAB, apresentam diferenças morfológicas marcantes: as células são menores, apresentam superfície rugosa e formam aglomerados de células

Abstract: The effect of cetyltrimethyiammonium bromide (CTAB) on ceils of Acetobacter aceti, A. pasteurianus, Escherichia co 11, Klebsiella terrigena, Leuconostoc mesenteraides, Lactobacillus fermentum, Alcaligenes f aecalisJ Pseudomonas aeruginosa, Ps. cepacia, Ps. mendocina, Ps acidovorans and...

Abstract: The effect of cetyltrimethyiammonium bromide (CTAB) on ceils of Acetobacter aceti, A. pasteurianus, Escherichia co 11, Klebsiella terrigena, Leuconostoc mesenteraides, Lactobacillus fermentum, Alcaligenes f aecalisJ Pseudomonas aeruginosa, Ps. cepacia, Ps. mendocina, Ps acidovorans and Saccharomyces cerevisiae was investigated, in order to elucidate the mechanism of CTAB action. Its effect on cell growth and metabolism, and action of chemical forms of agent were studied. The critical micelar concentration (c.m.c.) of CTAB in medium was lower than in water and its concentration lower than c.m.c. interact with medium protein. Both free and micelar form of agent were active against microbes. The formulations of medium has shown that magnesium concentration is responsible for delayed growth. Klebsiella terrigena did not have many nutricional requirements but Jcetobacter spp. were quite fastidious. The CTAB concentration required for growth inhibition was dependent on microbes as well as on medium composition. Acetobacter was inhibited at concentrations below c.m.c. in all tested media. With Enterobacteriaceae the inhibition occurred above c.m.c. in CANA 11 media and below c.m.c. in nutrient broth. Pseudomonas aeruginosa, Ps. cepacia and Ps. mendocina were very resistant to CTAB but Ps. acidovorans was not. Glicolysis, respiration and fermentation were inhibited by CTAB at concentration lower than growth inhibition. Lactate dehydrogenase and alcohol dehydrogenase were also inhibited at low concentration of CTAB. Enzymes from cells resistant to CTAB were sensitive to the agent only after cell disruption. CTAB caused lysis of protoplast which was a terminal phases of a series of events starting with membrane desorder. No solubilization of membrane was detected. Intact cells were not lysed with CTAB indicating that cell wall protected from lysis. Bacteria resistant to CTAB, Pseudomanas aeruginosa, Ps. cepacia and Ps, mendocina, showed identical protein pattern in membrane and citosol when cultivated with agents as compared to control media. Escherichia coli, Klebsiella terrigena and Ps. acidovorans showed different protein pattern in similar circunstances. Microscopic observation of E. coli cells cultivated in medium with CTAB showed different morphology. They were smaller with rough surface and they had tendency to aggregate