Orientador : Gilberto de Nucci

Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas

Resumo: A crotoxina, o componente mais tóxico isolado do veneno de Crotalus durissus terrificus, é um complexo proteico reversível composto por um peptídeo ácido, não tóxico e sem ativadade enzimática (crotapotina) e um componente básico, responsável pela toxicidade do complexo, a fosfolipase A2...

Resumo: A crotoxina, o componente mais tóxico isolado do veneno de Crotalus durissus terrificus, é um complexo proteico reversível composto por um peptídeo ácido, não tóxico e sem ativadade enzimática (crotapotina) e um componente básico, responsável pela toxicidade do complexo, a fosfolipase A2 (PLA2). Sabendo-se que várias proteínas isoladas a partir de venenos interferem na coagulação sanguínea e agregação plaquetária, o objetivo deste trabalho foi o estudo da atividade da crotoxina sobre a agregação plaquetária. A crotoxina foi isolada através de gel filtração do veneno bruto em uma coluna de Sephadex G-75, eluída com tampão bicarbonato de amônio (0.1 M; pH 8.0). A agregação das plaquetas humanas lavadas foi monitorada utilizando-se um agregômetro Payton e a liberação de TXA2 foi medida através de radioimunoensaio (RIA). O fracionamento de 100 mg de veneno, resultou em três principais picos, sendo o segundo pico correspondente à crotoxina. O grau de pureza da crotoxina foi confirmado, utilizando-se o método de cromatografia de alto desempenho (HPLC) através de uma coluna C 18 µ Bondapack. Crotoxina (15-50 µg/ml), produz uma agregacão de plaquetas lavadas de modo dose-dependente e irreversível, agregação esta inibida por uma pré-incubação da suspensão de plaquetas com SNP (500 µM) ou lIoprost (100 nM). A crotoxina também induz a liberação de TXB2 (207±8 ng/ml, n=6). Nossos resultados demonstram que a crotoxina induz a agregação de plaquetas humanas lavadas, independente da liberação de produtos de ciclo-oxigenase, assim como apresenta importante atividade coagulante.

Abstract: Crotoxin, the main toxic component isolated from the venom of the South American rattlesnake Crotalus durissus terrificus, is a reversible protein complex composed of a non-toxic non-enzymatic acid peptide (crotapotin) and a toxic basic phospholipase A2 (PLA2). Since several venom proteins...

Abstract: Crotoxin, the main toxic component isolated from the venom of the South American rattlesnake Crotalus durissus terrificus, is a reversible protein complex composed of a non-toxic non-enzymatic acid peptide (crotapotin) and a toxic basic phospholipase A2 (PLA2). Since several venom proteins interfere in blood coagulation and platelet aggregation, the objective of this study was to evaluate whether crotoxin induces human washed platelet aggregation. Crotoxin was isolated by gel filtration of the crude venom on a Sephadex G-75 column eluted with ammonium bicarbonate buffer (0.1 M, pH 8.0). Human washed platelet aggregation was monitored in a Payton aggregometer and thromboxane release by direct RIA. Fractionation of 100 mg of Crotalus durissus terrificus venom yielded three main peaks,of which the second contained crotoxin. The purity of crotoxin was confirmed by high pressure liquid chromatography analysis on a C 18 µ Bondapack column.
Crotoxin (15-50 µg/ml) produced dose-dependent and irreversible human washed platelet aggregation, which was inhibited by pre-incubation of the platelets with SNP (500 µM) or iloprost (100 nM) .Crotoxin also induced TXB2 release (207 ± 8 ng/ml, n=6), it did not inhibit crotoxin-induced aggrega!ion. Our results clearly demonstrate that crotoxin induces human washed platelet aggregation. Although previous reports state that crotoxin does not induce platelet aggregation, we presume that the difference observed is due to the procedure we have used (ammonium bicarbonate buffer instead of formate buffer) to elute crotoxin.