Orientador : Yong Kun Park

Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos e Agrícola

Resumo: Duas mil quatrocentas e sessenta linhagens de microrganismos foram isoladas do solo e testadas quanto à capacidade de desramificar a amilopectina. Foram encontradas três linhagens de bactérias produtoras de enzima amilolítica desramificante. Uma das linhagens, classificada como...

Resumo: Duas mil quatrocentas e sessenta linhagens de microrganismos foram isoladas do solo e testadas quanto à capacidade de desramificar a amilopectina. Foram encontradas três linhagens de bactérias produtoras de enzima amilolítica desramificante. Uma das linhagens, classificada como Flavobacterium sp produziu maior quantidade de enzima. A enzima desramificante de Flavobacterium sp hidrolizou as ligações a-1,6 glicosídicas da amilopectina e glicogênio, formando cadeias curtas de amilose mas não hidrolisou as ligações a-1,6 glicosídicas do pululano (polímero de maltotriose unidas pela extremidade por ligações a-1,6 glicosídicas). Portanto, a enzima desramificante de Flavobacterium sp é similar à outras isoamilases (glicogênio glucanohidrolase EC 3. 2.1.68). Estudou-se a produção e a purificação de isoamilase de Flavobacterium sp e determinou-se as características da enzima purificada. A eletroforese em gel de poliacrilamida da enzima purificada indicou uma única banda de atividade. O peso molecular foi estimado em 126.000 através do método de filtração em gel. O pH ótimo e temperatura ótima da enzima foram 6,3 e 40°C respectiva mente. A atividade enzimática foi ligeiramente inibida por NiSO4, CoCl2, Fe2(SO4)3, ZnSO4, CuSO4, MnSO4 e fortemente inibida por HgCl2 e AgNO3. Sais minerais como CaCl2, MgCl2, NaCl, BaCl2 e Li2O2 não inibiram a atividade enzimática. dietilditiocarbamato de sódio (10 mM), ázida de sódio (10 mM), sodium bisulfite (10 mM), iodoacetato (10 mM), p-hidroximercuribenzoate (10 mM), mercaptoetanol (10 mM) não inibiram a atividade enzimática. Por isto,grupos sulfidrilas da molécula da enzima não estão envolvidos na atividade catalítica. A ação simultânea da isoamilase de Flavobactevium e (B-amilase de soja hidrolizou quase completamente o amido de batata, amilo pectina de milho ceroso e glicogênio de ostra para maltose

Abstract: Two thousand four hundred sixty strains of microorganisms were isolated from soil and examined for their capacity to debranch amylopectin. Three strains of bacteria were found to be producers of debranching enzyme. One strain, which is classified as Flavobacterium sp produced large amounts...

Abstract: Two thousand four hundred sixty strains of microorganisms were isolated from soil and examined for their capacity to debranch amylopectin. Three strains of bacteria were found to be producers of debranching enzyme. One strain, which is classified as Flavobacterium sp produced large amounts of the enzyme. The debranching enzyme from Flavobacterium sp hydrolyzed a-1,6 glucosidic linkage of amylopectin and glycogen, forming short chain amylose, but did not hydrolyze a-1,6 glucosidic linkage of pululan (polymer of a-1,6 maltotriose joined endwise). Therefore, the debranching enzyme of Flavobacterium sp is similar to other isoamylases (glucogen glucanohydrolase EC 3.2.1.68). Production and purification of the Flavobacterium. isoamylase - were attempted and characterization of the purified enzyme was performed. Polyacrylamide gel electrophoresis of the purified enzyme showed a single band of activity. The molecular weight was 126.000 as estimated by gel filtration method. Optimum pH and temperatura of the purified enzyme were 6,3 and 40°C, respectively. The enzyme activity was inhibited slightly by NiSO4, MnSO4, CoCl2, Fe2(SO4)3, ZnSO4 and CuSO4 and strongly by HgCl2 and AgNO3. Metal ions such as CaCl2, MgCl2, NaCl, BaCl2 and Li2SO4 did not inhibit the enzyme activity. Sodium diethildithio carbamate (10 mM), sodium azide (10 mM), sodium bisulfite (10 mM), iodoacetate (10 mM) , p-hydroxymercuribenzoate (10 mM), mercaptoethanol (10 mM) did not inhibit enzyme activity. Thus sulfydryl groups of the molecule are not involved in the catalytic activity. The simultaneous action of Flavobacterium isoamylase and soy bean B-amylase hydrolyzes almost completely potato starch, waxy maize amylopectin and oyster glycogen to maltose