Orientador : Otavio Henrique de Oliveira Pavan

Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia

Resumo: Foram realizadas cinco passagens seriadas do Vírus de Poliedrose Nuclear de Autographa californica (VPNAc) no hospedeiro alternativo Diatraea saccharalis, sendo que o inoculo inicial foi uma variante genética deste vírus (E2). Quatro isolados virais foram obtidos (IV-1, IV-2, IV-3 e IV-4),...

Resumo: Foram realizadas cinco passagens seriadas do Vírus de Poliedrose Nuclear de Autographa californica (VPNAc) no hospedeiro alternativo Diatraea saccharalis, sendo que o inoculo inicial foi uma variante genética deste vírus (E2). Quatro isolados virais foram obtidos (IV-1, IV-2, IV-3 e IV-4), além do VPNAc original ( E2 ). Foram analisados dados de mortalidade, tempo de ação do vírus, estrutura morfológica do cristal viral, produção de vírus por inseto e proteínas estruturais do vírus. Os principais resultados e conclusões foram: a) O VPNAC foi capaz de infectar, multiplicar-se e produzir cristais infectivos no hospedeiro alternativo Diatraea saccharallis.b) A virulência do VPNAc para lagartas de D. saccharalis, medida através da DL50 aumentou progressivamente em cerca de 1000 vezes. c) Alguns cristais virais apresentaram forma cúbica ao invés da poliédrica normal, sendo que no último isolado obtido (IV-4) estes perfizeram 20% do total de cristais. d) Os poliedros de IV-4 foram cerca de 2 vezes maior em volume do que os poliedros do primeiro isolado inoculado (E2). e) Houve uma redução gradual da produção de vírus por larvas infectadas. Esta diminuição da produção foi de 16 vezes após a 4ª passagem do vírus por O.saccharalis e, após a 5ª passagem, ocorreu uma quase ausência de cristais virais. f) Os isolados de VPNAc apresentaram diferenças quanto a seus polipeptídeos estruturais quando analisados em gel de SDS e paliacrilamida. g) Dentre os cincos isolados virais estudados, foram identificados três grupos, E2/IV-1, IV-2 e IV-3/IV-4, quanto à atividade biológica e padrões eletroforéticos de suas proteínas estruturais, observando-se um aumento de virulência acompanhado por uma progressiva alteração dos peptídeos. O isolado IV-2 apresentou características intermediárias entre os outros dois grupos, E2/IV-1 e IV-3/IV-4. h) O tratamento adicional com SDS e 2-mercaptoetanol na purificação dos vírus não permitiu que se evidenciassem as diferenças nos padrões eletroforéticos dos cinco isolados virais. i) As alterações que ocorrem com o VPNAc provavelmente devem ter sido causadas por modificações do DNA viral provocadas pela passagem do vírus, originalmente uma variante geneticamente homogênea, em larvas do hospedeiro alternativo D. Saccharalis. j) A passagem seriada em hospedeiro alternativo é um método que permite fácil manipulação genética e seleção de isolados virais e um importante instrumento na compreensão do complexo sistema patógeno-inseto

Abstract: The genetic variant E2 from the Autographa californica Nuclear Polyedrosis Virus (AcNPV) was serially passed for five generations in its alternate host Oiatraea saccharalis the sugarcane borer. From these passages four isolates were obtained besides the original inoculum (IV-I, IV-2, IV-3,...

Abstract: The genetic variant E2 from the Autographa californica Nuclear Polyedrosis Virus (AcNPV) was serially passed for five generations in its alternate host Oiatraea saccharalis the sugarcane borer. From these passages four isolates were obtained besides the original inoculum (IV-I, IV-2, IV-3, IV-4 and E2). These isolates were compared to each other considering larval mortality, mode and timing of action, morphology of the polyhedra, polyhedral production and protein profile. As a result of this analysis the following results and conclusions were reached: a) The AcNPV-E2 was able to infect and produce infective polyhedra in its alternate host Diatraea saccharalis. b) A drastic and progressive increase in the virulence of the AcNPV isolates, indicated by thousand fold reduction of the LD50 values, was observed for D. saccharalis larvae. c) The increasing presence of abnormal larger cubic shaped polyhedra opposed to the regular polyhedra in the forth generation of the virus isolate (IV-4). d) A two fold increase in the number of polyhedral volume was observed when comparing the original (E2) and the selected inoculum (IV-4) e) A 16 fold reduction in the number of polyhedra produced per gram of infected larvae was observed when comparing the original inoculum (E2) and the forth generation (i. e. virus produced by inoculum IV-3). The inoculation of IV-4 resulted in an almost total absence of polyhedra in the infected larvae. f) The AcNPV isolates presented differences in the protein profile in the SDS polyacrilamide gel electrophoresis (SDS-PAGE). g) Based on the protein profile and biological activity the five isolates can be separated in the three groups, E2/IV-1, IV-2 e IV-3/ IV-4, indicating a growing virulence followed by an progressive alteration of peptides. The IV-2 isolate in both perspectives represents an intermediate group. h) The protein differences were not observed with the treatment of SDS and 2-mercaptoethanol in the purification procedure