Orientador: Young Kun Park

Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos

Um mil e sessenta e sete linhagens de fungos foram isoladas do solo e.testadas quanto à capacidade de produzir ß-galactosidase. Foi encontrada uma linhagem, classificada como Scopulariopsis sp, que produz alta atividade de ß ¿galactosidase. Estudou-se a produção e a purificação de ß -galactosidase...

Um mil e sessenta e sete linhagens de fungos foram isoladas do solo e.testadas quanto à capacidade de produzir ß-galactosidase. Foi encontrada uma linhagem, classificada como Scopulariopsis sp, que produz alta atividade de ß ¿galactosidase. Estudou-se a produção e a purificação de ß -galactosidase de Scopulariopsis sp e determinou-se as características da enzima purificada. A enzima foi produzida por fermentação semi-sólida, usando-se farelo de trigo para cultura do microorganismo. A enzima bruta suficientemente hidrolisa lactose em soro de leite. A enzima bruta foi purificada fracionamento, com sulfato de amônia e cromatografia em coluna por de DEAE-celulose e CM-celulose. A enzima purificada foi caracterizada verificando-se sua homogeneidade eletroforeticamente e seu peso molecular estimado ser 95 000, através do método de eletroforese em gel SDS poliacrilamida. O pH ótimo para atividade enzimática foi entre 3,6 a 5,0, usando-se ONPG (Orto-Nitrofenil ß -D-Galactoperanosideo) como substrato e com lactose como substrato o pH ótimo foi 4,5. A temperatura ótima para atividade enzimática foi 65 °C para ONPG e 55 °C para lactose. A atividade enzimática não sofre efeito pela adição de íons metálicos como CaC12, MgC12, KCl e outros reagentes como MnS04, NiS04, CuS04, porém foi verificado que AgN03 tem algum efeito inibitório sobre a atividade enzimática. Galactose inibe a ação da enzima, enquanto glicose não inibe. Dietilditiocarbamato de sódio (10mM). p-hidroximercuribenzoato (10 mM). mercaptoetanol (10 mM). não inibem a atividade enzimática Por isto, grupos sulfidrilas da molécula da enzima não estão envolvidos na atividade catalítica. A ß -galactosidase de, Scopulariopsis sp hidrolisou quase completamente (95 %) a lactose contida em soro ácido de leite (pH 4,5), após 50 horas de incubação a 55 °C, quando a atividade enzimática era 250 unidades por 100ml de soro de leite

Abstract: One thousand and sixty seven strain of fungi were isolated from soil and examined for their capacity for production of ß-galactosidase. It was found that one strain wich is classified a Scopulariopsissp has produced the highest activity of ß-galactosidase. Production and purification of...

Abstract: One thousand and sixty seven strain of fungi were isolated from soil and examined for their capacity for production of ß-galactosidase. It was found that one strain wich is classified a Scopulariopsissp has produced the highest activity of ß-galactosidase. Production and purification of ß-galactosidase from Scopulariopsis sp were attempted and characterization of the purified enzyme was performed. The enzyme was produced by semisolid fermentation using wheat bran culture of the microrganismo The crude enzyme suffici ently hydrolyzeq lactose in acid whey. The crude enzyme was purified by fractionation with ammonium sulfate, a DEAE-cellulose and CM-cellulose column graphies. The purified enzyme was characterized and found that chromato¬ was electrophoretically homogeneous and its molecular weight was estimated to be 95 000 by SDS-polyacrylamide gel electrophoresis. The optimum pH of the enzyme activity was between 3,6 and 5,0 when ONPG was used as substrate, and with lactose as substrate the optimum pH was 4,5. The optimum temperature was 65 °C to ONPG and 55 °C to Lactose. The activity did not suffer any effect by the addition of metals ions as CaC12, MgCI2, KCI and others reagents such as MnS04, NiS04, CuS04 but AgN03 has some innhibitery effect on the enzyme activity. Galactose inhibits enzyme activity where as glucose did not. Sodium diethildithio carbomate (10 mM), p-hydroxymercuribenzoate (10 mM), mercaptoethanol (10 mM) did not inhibit enzyme activity. Thus sulfydryl groups molecule are not involved in the catalytic activity. The ß-galactosidase from Scopulariopsis sp, hidrolyzed quite completely (95 %) the lactose content present in acid whey (pH 4,5) after 50 hr of incubation at 55 °C, when the enzyme activity was 250 units per100 ml of acid whey