Construção e seleção de uma biblioteca de anticorpos monoclonais scFv contra celulas tumorais de tireoide
Ana Paula Carneiro dos Santos
DISSERTAÇÃO
Português
T/UNICAMP Sa59c
[Generation and selection of monoclonal scFvs antibodies against thyroid carcinoma by phage display]
Campinas, SP : [s.n.], 2010.
107 p. : il.
Orientador: Laura Sterian Ward
Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas. Faculdade de Ciencias Medicas
Resumo: Fragmentos de anticorpos recombinantes têm se tornado ferramentas importantes em diversas áreas, tais como: Biologia Molecular, Farmacêutica e pesquisa Médica. Avanços recentes estão relacionados à aplicação desses anticorpos na oncologia, com estratégias diagnósticas e terapêuticas para...
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Resumo: Fragmentos de anticorpos recombinantes têm se tornado ferramentas importantes em diversas áreas, tais como: Biologia Molecular, Farmacêutica e pesquisa Médica. Avanços recentes estão relacionados à aplicação desses anticorpos na oncologia, com estratégias diagnósticas e terapêuticas para diferentes carcinomas. Neste estudo, uma biblioteca de fragmentos de anticorpos monoclonais scFv foi construída utilizando RNA total de sangue periférico de 25 pacientes com Carcinoma Diferenciado da Tireóide. Essa biblioteca scFv foi selecionada utilizando os métodos Bioppaning and Rapid Analysis of Selective Interactive Ligands (BRASIL) e Phage display contra células tumorais de tireóide, com o objetivo de encontrar ligantes específicos a superfície celular tumoral. Os clones selecionados foram identificados por Dot blotting, e a reatividade contra proteínas de tumor, adenoma e bócio foi analisada por Elisa. O clone scFv-C1 apresentou melhor reatividade pelas proteínas tumorais e foi escolhido para a imunoistoquímica. Esta foi realizada com lâmina de Micro-arranjo de tecido (TMA) com duzentos e vinte nove casos de tireóide, sendo 110 Carcinomas, 52 Adenomas Foliculares, 49 Bócios e 18 tecidos normais de tireóide. O anticorpo scFv-C1 reagiu especificamente aos tecidos de câncer, com reatividade ao citoplasma das células tumorais, foi capaz de distinguir o Grupo Câncer do Controle (Bócio, Adenoma e tireóide normal) com significância estatística (p<0,0001) e entre os carcinomas reagiu melhor com os tumores pequenos (TNM 1 e 2) e com pouca agressividade (p=0,050). O fragmento de anticorpo scFv-C1 pode ser um potencial candidato a biomarcador para o diagnóstico do Câncer de tireóide
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Abstract: Recombinant antibody fragments have become important tools in several fields, including molecular biology, pharmaceutical and medical research. In this study, a human single-chain variable fragment (scFv) antibody library was constructed using total RNA of leukocyte cells obtained from...
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Abstract: Recombinant antibody fragments have become important tools in several fields, including molecular biology, pharmaceutical and medical research. In this study, a human single-chain variable fragment (scFv) antibody library was constructed using total RNA of leukocyte cells obtained from blood of patients with well differentiated thyroid carcinoma. This scFv antibody library was selected using the Biopanning and Rapid Analysis of Selective Interactive Ligands method (BRASIL) and Phage display technology against tumor thyroid cells, aiming to find specific cell-surface binders. The selected clones were identified by dot blot and ELISA assays and their reactivity analyzed against tumor, goiter and adenoma proteins. One clone (scFv-C1) presented the highest reactivity ratio between cancer and the control group (goiter and adenoma) and was chosen for further analysis. Immunohistochemistry was performed by means of Tissue Microarray with two hundred and twenty-nine thyroid cases (110 carcinomas, 52 follicular adenomas, 49 goiters and 18 normal tissues) including 38 papillary, 42 follicular and 30 variant follicular in the carcinoma group. The scFv-C1 reacted specifically to cancer tissues sections, showed strong reactivity with cytoplasm and was able to distinguish cancer to control groups (goiter, adenoma and normal thyroid) with_statistically significance (p<0,0001). The scFv-C1 fragment antibody described here may be a potential biomarker candidate for diagnostics and prognostics of thyroid cancer
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Construção e seleção de uma biblioteca de anticorpos monoclonais scFv contra celulas tumorais de tireoide
Ana Paula Carneiro dos Santos
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