Estudo da atividade plaquetaria na asma alergica em ratos
Lineu Baldissera Junior
DISSERTAÇÃO
Português
T/UNICAMP B193e
[Study of platelet activity in allergic asthma in rats]
Campinas, SP : [s.n.], 2009.
89 f. : il.
Orientador: Edson Antunes
Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas
Resumo: Há relatos de que as plaquetas desempenham função importante no desencadeamento da resposta inflamatória alérgica, como a asma brônquica. Entretanto, existem poucos estudos funcionais avaliando a interação plaqueta-asma. O objetivo deste trabalho foi investigar a função plaquetária em modelo...
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Resumo: Há relatos de que as plaquetas desempenham função importante no desencadeamento da resposta inflamatória alérgica, como a asma brônquica. Entretanto, existem poucos estudos funcionais avaliando a interação plaqueta-asma. O objetivo deste trabalho foi investigar a função plaquetária em modelo de asma alérgica em ratos. Para tanto, ratos Wistar machos (180-200 g) foram sensibilizados à ovalbumina (OVA) e desafiados intranasalmente uma única vez, quatorze dias após a sensibilização. Para confirmar a eficácia da sensibilização à OVA, realizou-se a dosagem de IgE sérica e contagem de leucócitos no lavado broncoalveolar (LBA) após o desafio antigênico. O comportamento plaquetário foi avaliado através da contagem de plaquetas no sangue periférico entre 30 minutos a 24 horas após o desafio. As plaquetas foram isoladas em tempos variados após o desafio com OVA, a saber: 30 minutos, 2, 8 e 24 horas. Em seguida, realizou-se ensaios de adesão plaquetária em microplaca de 96 poços recoberta com fibrinogênio e ensaios de agregação plaquetária. Nossos resultados mostraram que a sensibilização e o desafio antigênico resultaram em aumento significativo dos níveis de IgE e infiltrado eosinofílico no LBA, validando o modelo alérgico adotado no estudo. Observou-se redução significativa do número de plaquetas circulantes em 30 minutos após o desafio com OVA, atingindo redução máxima em 8 horas, retornando aos valores basais 24 horas após o desafio. A adesão plaquetária ao fibrinogênio imobilizado e agregação plaquetária foram realizadas nos tempos de 30 min, 2, 8 e 24 horas após o desafio com OVA. A adesão plaquetária espontânea não foi modificada em nenhum dos tempos estudados. A adesão plaquetária induzida com ADP (5-50 µM) ou trombina (30-100 mU/mL) mostrou-se significativamente elevada em 30 minutos, e diminuída em 24 horas após o desafio com OVA. O desafio antigênico não modificou o perfil de agregação plaquetária, exceto para as plaquetas ativadas com ADP (50 µM) e/ou trombina (200 mU/mL), em 24 horas após o desafio. Com o intuito de se verificar se a via de sinalização de cálcio estaria envolvida nas mudanças observadas na adesão plaquetária, realizamos ensaios de mobilização de cálcio em plaquetas nos tempos de 30 min e 24 horas. A mobilização dos estoques internos de cálcio induzidos por ADP (20 µM) ou trombina (100 mU/mL) foram significativamente maiores em 30 minutos, e menores 24 horas após desafio antigênico à OVA. O influxo de cálcio externo foi significativamente maior em plaquetas de ratos estimuladas com ADP (20 µM) em 30 minutos após desafio com OVA. Após 24 horas, houve tendência de redução do influxo de cálcio externo em plaquetas de animais sensibilizados. Em conjunto, nossos dados mostram que o desafio intranasal com OVA acarreta, na fase imediata (30 minutos), aumento de adesão plaquetária ao fibrinogênio e elevação do transporte interno e externo de cálcio. Na fase tardia (24 horas), observamos redução da adesão plaquetária e diminuição dos estoques internos de cálcio
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Abstract: Evidences show that platelets play important roles in triggering the allergic inflammatory diseases, such as bronchial asthma. However, there are few functional studies attempting to evaluate the platelet-asthma interaction. The aim of this work was to investigate platelet function in a...
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Abstract: Evidences show that platelets play important roles in triggering the allergic inflammatory diseases, such as bronchial asthma. However, there are few functional studies attempting to evaluate the platelet-asthma interaction. The aim of this work was to investigate platelet function in a rat model of allergic asthma. Male Wistar rats (180-200 g) were sensitized with ovalbumin (OVA) and challenged intranasally fourteen days after sensitization. In order to assess the efficacy of OVA sensitization, serum IgE levels and leukocyte counts in bronchoalveolar lavage (BAL) fluid was performed post-antigen challenge. Counts of platelets in peripheral blood were performed from 30 minutes to 24 hours post-OVA challenge. Platelets were isolated in different time-periods after OVA challenge, namely: 30 minutes, 2, 8, 24 hours; then, ex-vivo platelet adhesion to immobilized fibrinogen and aggregation assays were performed. Our results showed that antigen-sensitization and challenge resulted in increased serum levels of IgE and eosinophil infiltration in BAL fluid, thus validating the allergic model adopted in this work. A significant reduction of circulating platelet was observed at 30 minutes post OVA-challenge, reaching the maximal reduction at 8 hours, and returning to baseline at 24 hours post-challenge. Platelet adhesion to immobilized fibrinogen and aggregation were performed at 30 minutes, 2, 8 and 24 hours after OVA challenge. Spontaneous platelet adhesion remained unaffected in all studied time. ADP (5-50 µM)- and thrombin (50-100 mU/mL)-stimulated platelet adhesion were significantly increased at 30 minutes, and decreased 24 hours after OVA challenge. The antigen challenge did not modify the platelet aggregation profile, except in platelets activated with 50 µM ADP and 200 mU/mL thrombin, at 24 hours post challenge. In order to verify whether calcium signaling pathway would be involved in the changes observed in platelet adhesion, we performed Ca2+ mobilization assays at 30 minutes and 24 hours. Internal calcium stores mobilization induced by ADP (20 µM) and thrombin (100 mU/mL) were significantly enhanced at 30 minutes, and decreased 24 hours after OVA-challenge. The extracellular calcium influx was significantly increased in ADP (20 µM)-stimulated rat platelets at 30 minutes post OVA-challenge. After 24 hours, the platelet calcium influx was lesser than that in nonsensitized animals. Together, our results show that intranasal OVA challenge causes an increased platelet adhesion at an early time post OVA-challenge (30 minutes) concomitant with elevated Ca2+ internal and/or external transport. At late phase (24 hours), we observed reduced platelet adhesion and decreased Ca2+ internal storage
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