Avaliação da citotoxicidade e fototoxicidade da riboflavina : determinação de marcadores moleculares de inflamação, senescencia e morte celular
Daisy Machado
DISSERTAÇÃO
Português
T/UNICAMP M18a
[Evaluation of riboflavin citotoxicity and phototoxicity]
Campinas, SP : [s.n.], 2009.
119 p. : il.
Orientadores: Carmen Verissima Ferreira, Silvia Mika Shishido
Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia
Resumo: A riboflavina (RF) é uma vitamina hidrossolúvel pertencente ao complexo vitamínico B2 e precursora das coenzimas FMN e FAD. Além da função biológica como componente de coenzimas, a RF apresenta atividade antitumoral e fotossensibilizante. A proposta principal desse estudo se baseou na...
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Resumo: A riboflavina (RF) é uma vitamina hidrossolúvel pertencente ao complexo vitamínico B2 e precursora das coenzimas FMN e FAD. Além da função biológica como componente de coenzimas, a RF apresenta atividade antitumoral e fotossensibilizante. A proposta principal desse estudo se baseou na avaliação da fototoxicidade da RF, bem como na determinação de marcadores moleculares da inflamação, senescência e morte celular, ações deletérias normalmente desencadeadas pela radiação UVA. Os resultados obtidos indicam que a RF
tem potencial aplicação na terapia fotodinâmica, levando se em conta os modelos celulares
utilizados, fibroblastos (BALB/c 3T3) e queratinócitos humanos (HaCaT). As células
BALB/c 3T3 tratadas com RF 6,0 mM e dose de 5 J/cm² de radiação UVA, apresentaram
indução de apoptose principalmente pela via intrínseca. A indução de senescência foi
evidenciada pelo aumento da p-caveolina e aumento da atividade da MMP-2 (principal
protease responsável pela degradação de colágeno). De acordo com os níveis de NFkB e p-
IKKa/b, a RF não alterou significativamente o processo de inflamação desencadeado pela
radiação UVA. Nas células HaCaT, o tratamento com 5,0 mM de RF e dose de 5 J/cm² de
radiação UVA levou a ativação da apoptose induzida tanto pela via extrínseca como pela
intrínseca. O aumento nos níveis de p-caveolina, p21 e da atividade das MMPs-2 e -9
sugerem à indução de processo de senescência precoce também nos queratinócitos. Além
disto, a diminuição da expressão do NF?B indica que o mesmo esteja se translocando para
o núcleo e, portanto, regulando a resposta inflamatória. Outro aspecto avaliado foi a
influência do copolímero F-127 na fototoxicidade da RF. A irradiação do hidrogel contendo
F-127 e riboflavina manteve a propriedade fototóxica da mesma. Nossos dados sugerem
que a RF apresenta potencial para uso em terapia fotodinâmica, uma vez que a mesma se
mostrou fototóxica quando irradiada com doses subtóxicas de radiação UVA.
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tem potencial aplicação na terapia fotodinâmica, levando se em conta os modelos celulares
utilizados, fibroblastos (BALB/c 3T3) e queratinócitos humanos (HaCaT). As células
BALB/c 3T3 tratadas com RF 6,0 mM e dose de 5 J/cm² de radiação UVA, apresentaram
indução de apoptose principalmente pela via intrínseca. A indução de senescência foi
evidenciada pelo aumento da p-caveolina e aumento da atividade da MMP-2 (principal
protease responsável pela degradação de colágeno). De acordo com os níveis de NFkB e p-
IKKa/b, a RF não alterou significativamente o processo de inflamação desencadeado pela
radiação UVA. Nas células HaCaT, o tratamento com 5,0 mM de RF e dose de 5 J/cm² de
radiação UVA levou a ativação da apoptose induzida tanto pela via extrínseca como pela
intrínseca. O aumento nos níveis de p-caveolina, p21 e da atividade das MMPs-2 e -9
sugerem à indução de processo de senescência precoce também nos queratinócitos. Além
disto, a diminuição da expressão do NF?B indica que o mesmo esteja se translocando para
o núcleo e, portanto, regulando a resposta inflamatória. Outro aspecto avaliado foi a
influência do copolímero F-127 na fototoxicidade da RF. A irradiação do hidrogel contendo
F-127 e riboflavina manteve a propriedade fototóxica da mesma. Nossos dados sugerem
que a RF apresenta potencial para uso em terapia fotodinâmica, uma vez que a mesma se
mostrou fototóxica quando irradiada com doses subtóxicas de radiação UVA.
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Abstract: Riboflavin (RF) is a water soluble vitamin which belongs to vitamin B2 complex, an essential precursor of FMN and FAD coenzymes. Besides being a component of
coenzymes, RF displays antitumoral and photossensitizing activities. The main proposal of
this study was to evaluate the RF... Ver mais Abstract: Riboflavin (RF) is a water soluble vitamin which belongs to vitamin B2 complex, an essential precursor of FMN and FAD coenzymes. Besides being a component of
coenzymes, RF displays antitumoral and photossensitizing activities. The main proposal of
this study was to evaluate the RF phototoxicity, as well as to determine molecular markers
of inflammation, senescence and cellular death, deleterious actions normally triggered by
the UVA radiation. Taking into consideration both cell lines used as models, fibroblasts
(BALB/c 3T3) and human keratinocytes (HaCaT), the results obtained indicate that RF has
potential application in photodynamic therapy. BALB/c 3T3 cells treated with 6.0 µM RF
associate with UVA radiation (5 J/cm²) showed apoptosis induction mainly via intrinsic
pathway. An increase of p-caveolin and MMP-2 activity (major protease responsible for
degradating collagen) evidenced senescence induction. According to NF?B and p-IKKa/ß
levels, RF did not significantly change the process of inflammation triggered by UVA
radiation, in fibroblast cells. In HaCaT cells 5.0 µM RF associated with UVA radiation (5
J/cm ²) was observed apoptosis induction thorough extrinsic and intrinsic pathways.
Senescence process was also observed in keratinocytes as indicated by an increase of pcaveolin, p21 and MMPs-2 and -9 activities. Besides, the decrease of NF?B expression
indicates that this transcription factor translocates into the nucleus and in turn, regulates
inflammatory response. Other aspect evaluated in this work was the influence of the F-127
in the RF phototoxicity. The irradiation of hydrogel containing F-127 and RF remained RF
phototoxicity property. Our findings suggest that RF displays potential for use in
photodynamic therapy, once it was phototoxic when irradiated with subtoxic UVA dose
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coenzymes, RF displays antitumoral and photossensitizing activities. The main proposal of
this study was to evaluate the RF... Ver mais Abstract: Riboflavin (RF) is a water soluble vitamin which belongs to vitamin B2 complex, an essential precursor of FMN and FAD coenzymes. Besides being a component of
coenzymes, RF displays antitumoral and photossensitizing activities. The main proposal of
this study was to evaluate the RF phototoxicity, as well as to determine molecular markers
of inflammation, senescence and cellular death, deleterious actions normally triggered by
the UVA radiation. Taking into consideration both cell lines used as models, fibroblasts
(BALB/c 3T3) and human keratinocytes (HaCaT), the results obtained indicate that RF has
potential application in photodynamic therapy. BALB/c 3T3 cells treated with 6.0 µM RF
associate with UVA radiation (5 J/cm²) showed apoptosis induction mainly via intrinsic
pathway. An increase of p-caveolin and MMP-2 activity (major protease responsible for
degradating collagen) evidenced senescence induction. According to NF?B and p-IKKa/ß
levels, RF did not significantly change the process of inflammation triggered by UVA
radiation, in fibroblast cells. In HaCaT cells 5.0 µM RF associated with UVA radiation (5
J/cm ²) was observed apoptosis induction thorough extrinsic and intrinsic pathways.
Senescence process was also observed in keratinocytes as indicated by an increase of pcaveolin, p21 and MMPs-2 and -9 activities. Besides, the decrease of NF?B expression
indicates that this transcription factor translocates into the nucleus and in turn, regulates
inflammatory response. Other aspect evaluated in this work was the influence of the F-127
in the RF phototoxicity. The irradiation of hydrogel containing F-127 and RF remained RF
phototoxicity property. Our findings suggest that RF displays potential for use in
photodynamic therapy, once it was phototoxic when irradiated with subtoxic UVA dose
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Ferreira, Carmen Veríssima, 1969-
Orientador
Shishido, Silvia Mika
Coorientador
Baptista, Mauricio da Silva
Avaliador
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Daisy Machado
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