Analise das vias de sinalização intracelulares em linhagens de celulas produtoras de insulina expostas ao INGAP-PP
Flavia Maria Moura de Paula
DISSERTAÇÃO
Português
T/UNICAMP P281a
[Modulation of intracellular signaling pathways in insulin-producing cells lines by INGAP-PP]
Campinas, SP : [s.n.], 2009.
54f. : il.
Orientadores: Antonio Carlos Boschero, Kleber Luiz de Araujo e Souza
Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia
Resumo: INGAP (Islet Neogenesis Associated Protein), um peptídeo primeiramente dentificado em hamsters, cujo pâncreas foi previamente embrulhado em papel celofane, tem como função principal induzir neogênese e diferenciação de células beta pancreáticas, além de melhorar a secreção de insulina...
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Resumo: INGAP (Islet Neogenesis Associated Protein), um peptídeo primeiramente dentificado em hamsters, cujo pâncreas foi previamente embrulhado em papel celofane, tem como função principal induzir neogênese e diferenciação de células beta pancreáticas, além de melhorar a secreção de insulina induzida por glicose e aminoácidos. Existem poucas informações a respeito dos mecanismos intracelulares desencadeados pelo INGAP em células beta. Assim, este trabalho teve como objetivo estudar tais mecanismos em 2 linhagens de células beta pancreáticas produtoras de insulina, denominadas RINm5F e MIN6. Para isso foi utilizado o INGAP-PP (INGAP104-118) constituído por uma seqüência de 15 aminoácidos e que mantém as mesmas propriedades da molécula do INGAP. Durante o procedimento experimental foi realizado um "screening" dos elementos responsivos a alguns fatores de transcrição. A expressão de algumas proteínas como receptor muscarínico M3, p85, AKT, p70S6k, PCNA e NF?B foi analisada, assim como a secreção de insulina estimulada por glicose, a mobilização de cálcio intracelular e a medida de viabilidade celular. A exposição das células MIN6 ao INGAP-PP aumentou a secreção de insulina induzida por glicose assim como a mobilização intracelular de cálcio. INGAP-PP ativou os fatores de transcrição c-Myc, SRE e em especial o NF?B nas duas linhagens celulares. A viabilidade celular também foi aumentada nas células expostas ao INGAP-PP a qual foi acompanhada de aumento na expressão de PCNA, proteína diretamente relacionada com a progressão do ciclo celular. Ainda, a expressão protéica do receptor muscarínico M3 foi aumentada na presença de INGAP-PP. Esse efeito foi bloqueado pela pré-exposição das células a um inibidor farmacológico do NF?B. Pode-se concluir que a ativação moderada do c-Myc e o aumento na expressão de PCNA estão relacionados com o aumento na viabilidade celular. Adicionalmente, conclui-se que a ativação moderada do NF?B induzida pelo INGAP-PP controla direta ou indiretamente a expressão do receptor M3 e tal processo pode estar relacionado sinergicamente com o aumento na proliferação celular.
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Abstract: The pentadecapeptide comprising the 104-118 aminoacid sequence of the ilotropin-derived Reg3- related islet neogenesis associated protein (INGA-PP) has been implicated in pancreatic beta-cell neogenesis and enhancement of the insulin secretion in pancreatic islets. There is little...
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Abstract: The pentadecapeptide comprising the 104-118 aminoacid sequence of the ilotropin-derived Reg3- related islet neogenesis associated protein (INGA-PP) has been implicated in pancreatic beta-cell neogenesis and enhancement of the insulin secretion in pancreatic islets. There is little information regarding the mechanism of action of the polypeptide. The aim of this study was to investigate intracellular pathways by which INGAP-PP signs insulin-producing cells. The results show that INGAP-PP increased the insulin secretion and induced mobilization of intracellular calcium in MIN6 cells. INGAP-PP exposure activated c-Myc, serum response element (SRE) and particularly nuclear factor kappa B (NF?B) in both MIN6 and RINm5F insulin-producing cells. There was an increase in the proliferation rate of viable cells that was accompanied by an increase in the proliferating cell nuclear antigen (PCNA) protein expression following INGAP-PP treatment. In addition, INGAP-PP increased the expression of the muscarinic M3 receptor subtype. This effect was impaired by blocking NF?B signaling pathway. Cells incubated in the presence of foetal calf serum (FCS) also showed increased M3 receptor expression. In conclusion, these data show that activation of c-Myc signaling pathway and increased PCNA expression might be involved in the increased proliferation rate of insulin-producing cells following incubation with INGAP-PP. NF?B signaling plays an essential role in controlling the expression of the acetylcholine M3 receptor.
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Boschero, Antonio Carlos, 1943-
Orientador
Souza, Kleber Luiz de Araujo e
Coorientador
Anhê, Gabriel Forato, 1980-
Avaliador
Analise das vias de sinalização intracelulares em linhagens de celulas produtoras de insulina expostas ao INGAP-PP
Flavia Maria Moura de Paula
Analise das vias de sinalização intracelulares em linhagens de celulas produtoras de insulina expostas ao INGAP-PP
Flavia Maria Moura de Paula
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