Participação de celulas T regulatorias (CD4+CD25+) na imunossupressão observada em pacientes com paracoccidioidomicose
Maria Carolina Ferreira
DISSERTAÇÃO
Português
T/UNICAMP F413p
[Participation of regulatory T'cells (CD4+CD25+) in the immunossupression observed on paracoccidioidomycosis]
Campinas, SP : [s.n.], 2009.
114 p. : il.
Orientadores: Ronei Luciano Mamoni, Maria Heloisa Souza Lima Blotta
Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas
Resumo: Pacientes com paracoccidioidomicose (PCM) apresentam supressão da resposta imunológica celular, caracterizada por testes de hipersensibilidade do tipo tardio negativos a antígenos do P. brasiliensis, alta taxa de apoptose de linfócitos e alta expressão de CTLA-4 (CD152) e alta produção de...
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Resumo: Pacientes com paracoccidioidomicose (PCM) apresentam supressão da resposta imunológica celular, caracterizada por testes de hipersensibilidade do tipo tardio negativos a antígenos do P. brasiliensis, alta taxa de apoptose de linfócitos e alta expressão de CTLA-4 (CD152) e alta produção de citocinas supressoras (IL-10 e TGF-b). Esses dados indicam a possível participação de células T regulatórias (CD4+CD25+ - Tregs) na PCM. O objetivo desse trabalho foi verificar se, e por qual mecanismo as células T regulatórias estão envolvidas nessa imunossupressão. Para isso, analisamos o número, fenótipo, assim como a atividade funcional das células regulatórias do sangue periférico de pacientes com PCM antes e após o tratamento antifúngico efetivo. O número e o fenótipo das células T regulatórias foram avaliados por citometria de fluxo, e os resultados demonstraram que pacientes com PCM ativa (DA) apresentam um maior número dessas células que pacientes tratados (DT) ou controles normais (C). Além disso, observamos uma maior expressão de CD95L, CTLA-4, LAP-1 e GITR em células regulatórias do grupo DA em relação aos grupos DT e C. A expressão do RNAm (quantificado por PCR em tempo real) para FoxP3, IL-10 e TGF-ß em CMSP ex vivo também foram maiores no grupo DA que nos controles e pacientes do grupo DT. Com o intuito de comparar a atividade funcional das células T regulatórias, analisamos o efeito da cocultura com células T regulatórias na resposta proliferativa de CMSP estimuladas com ConA. As células regulatórias do grupo DA exibiram uma atividade supressora maior que as provenientes do grupo DT ou C, de uma maneira dose dependente. Para verificar se o mecanismo por meio do qual as células regulatórias exercem sua atividade é dependente de contato, utilizamos um sistema "transwell". Os resultados demonstraram que a atividade supressora das células T regulatórias do grupo controle é dependente de contato, mas que essa atividade para as células provenientes dos pacientes do grupo DA é apenas parcialmente revertida com esse sistema. A adição de citocinas supressoras recombinantes (IL-10 e TGF-ß), assim como de anticorpos neutralizantes para essas citocinas nas coculturas, mostrou que a produção de citocinas regulatórias pode ser outro mecanismo utilizado pelas células regulatórias do grupo DA. Em conclusão, o número aumentado de células T regulatórias no sangue periférico de pacientes com DA, expressando altos níveis de moléculas associadas à atividade regulatória, ao lado da alta expressão do RNAm para FoxpP3, IL-10 e TGF-b, sugere uma participação dessa população de linfócitos na imunossupressão observada em pacientes com PCM ativa. Além disso, nossos resultados indicam que as células T regulatórias dependem principalmente do contato intercelular para exercer seus efeitos supressores, e que a produção de citocinas supressoras também está envolvida nesse processo.
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Abstract: Patients with paracoccidioidomycosis (PCM) present suppression of cellular immune response characterized by negative DTH to P. brasiliensis antigens, elevated apoptosis of lymphocytes, high expression of CTLA-4, and production of IL-10 and TGF-ß. Together these data point towards the...
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Abstract: Patients with paracoccidioidomycosis (PCM) present suppression of cellular immune response characterized by negative DTH to P. brasiliensis antigens, elevated apoptosis of lymphocytes, high expression of CTLA-4, and production of IL-10 and TGF-ß. Together these data point towards the involvement of regulatory T cells (CD4+CD25+ - Tregs) in PCM. The aims of this study were to verify whether and how Tregs are involved in this immunosuppression, through the analysis of the number and the phenotype, as well as, the functional activity of Tregs cells from peripheral blood of patients before and after antifungal treatment. The number and phenotype of Tregs cells were evaluated by flow cytometry, and the results showed that PCM patients with active disease (AD) present higher number of Treg cells than patients after treatment (TD) or healthy controls (C). Furthermore, we observed higher expression of CD95L, CTLA-4, LAP-1 and GITR on Tregs from AD group, than in cells from TD and C groups. mRNA expression (quantified by qRT-PCR) for FoxP3, IL-10 and TGF-ß in ex vivo PBMC, were also higher in AD group than in controls and in TD group. In order to compare the functional activity of Tregs, we analyzed the effect of Treg cells on the proliferative response of PBMC stimulated with ConA. Tregs from AD group exhibited stronger regulatory activity than cells from TD and C groups, in a dose dependent manner. To verify the possible mechanism through which Tregs suppress the cell proliferation we utilized a transwell system, which showed that the contact is mandatory for regulatory activity of Treg cells from C group, but had only a partial involvement in cells from AD patients. The addition of IL-10 and TGF-ß and anti cytokines in the co-cultures showed that the production of immunoregulatory cytokines may be other mechanism used by Tregs. In conclusion, the increased number of Treg cells in peripheral blood of patients with active disease, expressing high levels of regulatory markers and suppressive activity, besides the high expression of Foxp3, IL-10 and TGF-ß mRNAs suggest the potential participation of this population in the immunosuppression observed during the disease. Moreover, our results indicate that Tregs act mainly by contact to exert their inhibitory effects, but the production of immunoregulatory cytokines are also involved.
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Mamoni, Ronei Luciano, 1974-
Orientador
Blotta, Maria Heloisa de Souza Lima, 1953-
Orientador
Camara, Niels Olsen Saraiva
Avaliador
Participação de celulas T regulatorias (CD4+CD25+) na imunossupressão observada em pacientes com paracoccidioidomicose
Maria Carolina Ferreira
Participação de celulas T regulatorias (CD4+CD25+) na imunossupressão observada em pacientes com paracoccidioidomicose
Maria Carolina Ferreira
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