Construção e caracterização de linhagens de Salmonella enterica mutantes nos genes de IHF (Integral Host Factor)
Guilherme Martines Teixeira Mendes
DISSERTAÇÃO
Português
T/UNICAMP M522c
[Construction and characterization of Salmonella enterica strains mutants in IHF (Integral Host Factor) genes]
Campinas, SP : [s.n.], 2008.
98f. : il.
Orientador: Marcelo Brocchi
Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas
Resumo: O gênero Salmonella spp é formado por bacilos gram-negativos, que podem ser divididos em 3 espécies: S. enterica, S. bongori e S. subterranea. A maioria das sorovariedades patogênicas para o homem está incluída no subgrupo I da espécie S. enterica. A infecção por S. enterica inicia-se com a...
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Resumo: O gênero Salmonella spp é formado por bacilos gram-negativos, que podem ser divididos em 3 espécies: S. enterica, S. bongori e S. subterranea. A maioria das sorovariedades patogênicas para o homem está incluída no subgrupo I da espécie S. enterica. A infecção por S. enterica inicia-se com a ingestão de água ou alimentos contaminados. Estes microrganismos são patógenos intracelulares facultativos e, uma vez ingeridos, apresentam a capacidade de aderir e invadir células da mucosa intestinal, preferencialmente células M. Uma vez ultrapassada a mucosa intestinal, S. enterica invade, persiste e prolifera no interior de vacúolos de células do sistema retículo endotelial podendo assim, alcançar diferentes órgãos e tecidos do hospedeiro, causando infecção sistêmica. Sendo assim, linhagens mutantes avirulentas, mas ainda capazes de causar infecção transitória, são boas candidatas a potenciais vacinas vivas orais. Tais mutantes são potenciais carreadores de proteínas heterólogas, compondo, assim, as chamadas vacinas multi-valentes. Que seja de nosso conhecimento, não existem mutantes atenuados de S. enterica desenvolvidos inteiramente no Brasil, havendo necessidade de pagamento de patentes a grupos estrangeiros para sua utilização. Em eucariotos, o DNA cromossômico bacteriano está associado a proteínas (histonas) formando o núcleo, enquanto em procariotos, estas proteínas são denominadas histona-like, formando um nucleóide. Dentre essas proteínas podemos citar a IHF (integration host factor), um heterodímero que controla ou influencia vários processos celulares, como a duplicação e recombinação do DNA, além de regular positiva ou negativamente a expressão de vários genes. Neste estudo, mutantes nulos para os genes himA e himD de IHF foram criados pela técnica de recombinação homóloga mediada pelo sistema ? Red (Datsenko e Wanner, 2000) e testados quanto a atenuação da virulência e capacidade de desencadear resposta imune efetiva e protetora contra a salmonelose murina. Os mutantes também foram caracterizados quanto a diversas características biológicas, como a capacidade de invasão e sobrevivência intracelular, resistência a radicais reativos de oxigênio e nitrogênio, ente outras, sendo os resultados comparados com as respectivas linhagens selvagens. Os mutantes himA e himD de S. enterica foram atenuados e capazes de induzir resposta imune protetora quando desafiados com doses elevadas da linhagem selvagem, indicando que estas linhagens recombinantes são potenciais candidatas a vacinais vivas orais
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Abstract: The genus Salmonella sp is formed by gram-negative bacilli, which can be divided into 3 species: S. enterica, S. bongori and S. subterranea. The majority of the serovars pathogenic to humans is included in the subgroup I of the S. enterica species. The infection with S. enterica starts...
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Abstract: The genus Salmonella sp is formed by gram-negative bacilli, which can be divided into 3 species: S. enterica, S. bongori and S. subterranea. The majority of the serovars pathogenic to humans is included in the subgroup I of the S. enterica species. The infection with S. enterica starts either the ingestion of contaminated water or food. These microorganisms are facultative intracellular pathogens and, once ingested, they have the capacity to adhere and invade cells of the intestinal mucosa, with preference for M cells. Then, S. enterica can invade and proliferate within vacuoles of immune cells, particularly macrophages, achieving different organs and tissues of the host, causing systemic infection. Mutant strains of S. enterica with attenuation of the virulence but that are still able to cause a transient infection, are good candidates for potential live oral vaccines. These mutants are also good carriers of heterologous antigens to cells of the immunological system, been able to induce an effective immunological response. To the best of our knowledge, no mutants of this type were developed in Brazil leading to the needed to pay royalties to foreign groups for their use. In prokaryotes the genomic DNA are associated with a number of proteins, the so called histone-like proteins, with structural and regulatory properties, forming the nucleoid. The IHF (Integration Host Factor) is one of the more abundant histone-like in prokaryotes. IHF is a heterodimeric DNA-binding protein that controls a number of cellular processes, such as DNA duplication and DNA recombination and also modulates the expression of different genes. In this work we constructed recombinant strains of S. enterica mutants for the himA and himD genes that encode for the IHF subunits using the ? Red system (Datsenko and Wanner, 2000) and tested for attenuation and immunogenicity. The mutant strains were also characterized and compared to the parental strains for other biological characteristics such as the capacity to invade and proliferate into eukaryotic cells and to survive to different stress conditions. The S. enterica himA and himD mutant strains were attenuated for virulence and able to induce a protective immunity against the wild type strain of S. enterica indicating that these recombinant strains are candidates to formulate a new live oral vaccine
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Construção e caracterização de linhagens de Salmonella enterica mutantes nos genes de IHF (Integral Host Factor)
Guilherme Martines Teixeira Mendes
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