Resumo: O melanoma é, dentre as neoplasias de pele, a de pior prognóstico devido ao seu alto índice de metástases. A ácido graxo sintase (FAS) é uma enzima metabólica formada por um homodímero com massa molecular aproximada de 250 kDa responsável pela síntese de ácidos graxos saturados de cadeia longa. Sua expressão é baixa em tecidos normais e alta em muitos tumores malignos, nos quais parece estar associada com um pior prognóstico para o paciente, como ocorre nos melanomas. Existem evidências que, nas células malignas, a atividade de FAS é necessária para a produção de fosfolipídios que compõem as membranas celulares. Inibidores específicos da atividade de FAS bloqueiam a síntese de DNA e causam apoptose em linhagens celulares derivadas de neoplasias malignas de próstata, mama e cólon. A droga Orlistat (Xenical®), usada para tratamento de obesidade, foi recentemente descrita como tendo propriedades anti-neoplásicas em câncer de próstata e mama, devido à sua capacidade de bloquear especificamente a atividade de FAS. Este trabalho teve como objetivo principal estudar o efeito da inibição da enzima FAS em células B16F10 e em um modelo experimental de metástases espontâneas de melanoma em camundongos. O tratamento de camundongos portadores de melanomas intraperitoneais causados pela injeção de células B16F10 com Orlistat reduziu em 50% o número de metástases espontâneas para os linfonodos mediastínicos. Experimentos de citometria de fluxo mostraram que o tratamento da linhagem celular B16F10 com Orlistat inibe a proliferação devido ao acúmulo de células em G0/G1 e bloqueio da passagem para a fase S, que foi confirmado por um aumento na quantidade da proteína p27Kip1 e concomitante redução de Skp2. Através de ensaios de marcação com Anexina-V, observamos que Orlistat provoca um aumento na taxa de apoptose destas mesmas células. O presente modelo animal de metástases de melanoma mostrou-se útil para o estudo de drogas com potencial efeito anti-tumoral, como o Orlistat. A inibição da atividade de FAS tem um importante papel na disseminação metastática de melanomas de camundongos, possivelmente por inibir a proliferação e provocar apoptose nas células B16F10 Ver menos

Abstract: Malignant melanoma is a cancer with poor prognosis due to its high metastatic potential and resistance to the existing chemotherapeutic agents. Fatty acid synthase is a metabolic enzyme with molecular mass of 250 kDa responsible for the endogenous biosynthesis of fatty acids. FAS converts acetyl-CoA and malonyl-CoA in the long chain fatty acid palmitate. FAS activity is downregulated in most normal human tissues except liver, adipose tissue, fetal lung and lacting breast. On the other hand, FAS is overexpressed in several malignant neoplasms, including malignant melanoma. For some tumors, FAS overexpression has been associated with a poor prognosis. Recently, the new inhibitor of FAS activity Orlistat was hown to inhibit the proliferation of prostate and breast cancer cell lines and the growth of their xenograft tumors. In this work we studied the effects of FAS inhibition in the B16F10 melanoma cell line and in a animal model for melanoma metastasis. B16F10 murine melanoma cells were intraperitoneally injected in 40 mice and an inhibition of 50% in the number of mediastinal lymph node metastasis was observed in the Orlistat treated group. The inhibition of FAS was confirmed by ¿Oil Red O¿ staining in frozen tissue sections. We also found that Orlistat promoted apoptosis and inhibited the proliferation of B16F10 cells by blocking cell cycle progression, as demonstrated by flow cytometry experiments. Western blotting analysis of protein extracts obtained from Orlistat-treated cells revealed overexpression of p27Kip1 and downregulation of Skp2. In conclusion, the present animal model is useful for the study of drugs with antitumoral effect like Orlistat. The inhibition of FAS has an important role on the metastatic spread of melanoma in C57BL6 mice by blocking the proliferation and inducing apoptosis in B16F10 cells. In addition, the inhibition of FAS by Orlistat represents a new approach in order to develop drugs for melanoma chemotherapy Ver menos