Resumo: A presença de hipertensão arterial (HA) em pacientes com diabetes mellitus (DM) é identificada como o fator de risco independente mais importante para a progressão da retinopatia diabética (RD). O DM por si aumenta o estresse oxidativo na retina tanto em humanos quanto em animais. Contudo, o efeito da combinação da HA e do DM na retina ainda não foi demonstrado. Dessa forma, o objetivo desse estudo foi investigar o estresse oxidativo na retina de modelo experimental que combina a HA genética e o DM induzido por estreptozotocina. Ratos espontaneamente hipertensos (SHR) de 4 semanas de idade e seus controles normotensos (WKY) receberam injeção intravenosa de estreptozotocina para indução do DM. Após 20 dias, os ratos foram sacrificados e os olhos e as retinas foram coletadas. Foi observado aumento na produção de ânion superóxido, avaliada através da quimiluminescência da lucigenina, nos ratos WKY diabéticos em relação aos controles (p<0,03) e os ratos SHR, controles e diabéticos, apresentaram elevada produção de superóxido em relação aos WKY controles (p<0.009). O sistema antioxidante da glutationa (forma reduzida-GSH) apresentou diminuição somente nos animais SHR diabéticos (p<0,04). A nitração de tirosina avaliada por imunohistoquímica para nitrotirosina (NT) foi
igualmente elevada nos animais WKY diabéticos e SHR controles comparada com o grupo WKY controle (p<0,03) e foi observado um aumento nos animais SHR diabéticos (p<0,02). O dano do DNA devido ao estresse oxidativo avaliado por imunohistoquímica para 8-hidroxi-2¿-deoxiguanosina (8-OHdG) foi elevado nos animais SHR controles em comparação com os WKY controles (p=0,0003) e foi mais aumentado nos animais SHR diabéticos (p<0,0001). A atividade de NADPH oxidase, avaliada pela expressão de gp91phox e NOX-4, não apresentou alteração na retina dos animais hipertensos e diabéticos. Adicionalmente, a expressão do receptor de AGE, RAGE, não apresentou alteração no período estudado. Os ensaios de western blot para verificar a atividade de NF-kB demonstraram aumento somente nos ratos hipertensos. O DM determina um desequilíbrio precoce entre os sistemas oxidante e antioxidante causando danos à retina e a presença da HA exacerba este efeito. Essas anormalidades podem contribuir para o mecanismo pelo qual a hipertensão arterial agrava a RD Ver menos

Abstract: The presence of arterial hypertension in patients with diabetes mellitus (DM) is identified as the most important independent risk factor for progression of diabetic retinopathy (DR). Independently, diabetes and hypertension increase oxidative stress in the retina both humans and animals. However, the effect of the combination of both hypertension and DM in the retina was never addressed. Therefore, the aim of this study was to investigate the oxidative stress in the retina of an experimental model that combines hypertension and DM. Four week old spontaneously hypertensive rats (SHR) and their normotensive counterpart Wystar Kyoto (WKY) rats were rendered diabetic by intravenous injection of streptozotocin. After 20 days, the rats were sacrificed and the eyes and retinas were collected. The production of superoxide evaluated by enhanced lucigenin method was higher in diabetic than the control WKY (p<0.03) and the SHR rats showed elevated superoxide production in both control and diabetic groups compared with non diabetic WKY (p<0.009). The antioxidant defense system of glutathione (reduced form, GSH), was significantly diminished only in diabetic SHR (p<0.04). Tirosyne nitration evaluated by immunohystochemistry for nitrotyrosine (NT) was equally elevated in both diabetic WKY and control SHY compared with control WKY (p<0.03) and further increment was observed in diabetic SHR group (p<0.02). The DNA damage due oxidative stress evaluated by immunohystochemistry for 8-hydroxy-2¿-deoxyguanosine (8-OHdG) was higher in control SHR than in control WKY (p=0.0003) and further increment was detect in diabetic SHR rats (p<0.0001). The NADPH oxidase activity, evaluated by the retinal expression of gp91phox and NOX-4, was not altered in the retina from hypertensive and diabetic rats. The expression of AGE-receptor (RAGE) was not altered. Western blot assay for NF-kB showed increased in control and diabetic SHR rats. Diabetes determines an early unbalance between oxidant and antioxidant systems leading to damage in the retina and the presence of hypertension exacerbates this effect. These abnormalities may contribute to mechanism by which the hypertension aggravates RD Ver menos