Expressão do fator de regulação miogenica MyoD, na musculatura estriada esqueletica do pacu (Piaractus mesopotamicus), durante o crescimento
Fernanda Losi Alves de Almeida
DISSERTAÇÃO
Português
(Broch.)
T/UNICAMP AL64e
[Expression of myogenic regulatory factor MyoD in skeletal muscle of pacu (Piaractus mesopotamicus) during growth]
Campinas, SP : [s.n.], 2007.
54f. : il.
Orientador: Maeli Dal Pai Silva
Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia
Resumo: Nos peixes, o crescimento do tecido muscular ocorre por hipertrofia e/ou hiperplasia a partir da proliferação e diferenciação de mioblastos adultos ou células miossatélites, processos regulados pela expressão diferencial dos fatores de regulação miogênica (MRFs). O objetivo desse trabalho...
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Resumo: Nos peixes, o crescimento do tecido muscular ocorre por hipertrofia e/ou hiperplasia a partir da proliferação e diferenciação de mioblastos adultos ou células miossatélites, processos regulados pela expressão diferencial dos fatores de regulação miogênica (MRFs). O objetivo desse trabalho foi avaliar os mecanismos de crescimento muscular hiperplasico e hipertrofico e a expressão do MRF MyoD, na musculatura branca do pacu (Piaractus mesopotamicus), durante o crescimento. Exemplares juvenis (n=5) e adultos (n=5) de pacu foram anestesiados, sacrificados e determinados o peso corporal (g) e o comprimento total (cm). Fragmentos musculares brancos da região dorsal de cada exemplar, em cada fase estudada, foram congelados e imersos em nhexano congelado em nitrogenio liquido. Cortes histológicos (10 µm), obtidos em criostato, foram submetidos à coloraaço hematoxilina-eosina para avaliaaço da morfologia e morfometria das fibras musculares brancas. Foi calculado o menor diametro de 100 fibras musculares brancas em cada animal de cada fase estudada. As fibras musculares foram distribuídas em classes, na dependnncia do seu diametro (<20, 20-50, >50 0m), para avaliar o grau de crescimento hipertrtfico e hiperplpsico da musculatura. A expresseo do MRF MyoD na musculatura branca foi analisada por ReaReo em Cadeia da Polimerase apos Transcricro Reversa (RT - PCR). Todos os produtos visualizados em gel de agarose a 1% foram clonados e sequenciados. A morfologia da musculatura dos exemplares juvenis e adultos foi semelhante, apresentando um padrao em mosaico caracterizado por fibras de diferentes di metros. Nos exemplares juvenis, foi observado um predomdnio de fibras com diametro menor que 20 2m, caracterizando intensa hiperplasia. Nos exemplares adultos, houve o predomdnio de fibras musculares com di metro maior que 50 5m, caracterizando intensa hipertrofia da musculatura. A expresseo do RNAm para o gene MyoD foi significativamente maior na fase juvenil, se comparada com a fase adulta. Foi obtida a sequencia consenso parcial do gene MyoD (338 pares de bases) expresso na musculatura branca do pacu. Essa sequencia apresentou similaridade com as sequencias de MyoD de varias especies de vertebrados, incluindo peixes teleesteos. A expresseo diferencial do MRF MyoD, observada nas fases de crescimento juvenil e adulta do pacu, possivelmente seja responsavel pelas diferenras observadas no padrao de crescimento, com a hiperplasia predominando nos juvenis e a hipertrofia, nos adultos
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Abstract: Skeletal muscle growth in fish occurs by hypertrophy and hyperplasia and is dependent of the proliferation and differentiation of myogenic progenitor cells, events regulated by the diferential expression of the myogenic regulatory factors (MRFs). The aim of this study was to analyze the...
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Abstract: Skeletal muscle growth in fish occurs by hypertrophy and hyperplasia and is dependent of the proliferation and differentiation of myogenic progenitor cells, events regulated by the diferential expression of the myogenic regulatory factors (MRFs). The aim of this study was to analyze the hyperplasia and hypertrophy processes and the MRF MyoD expression in the white muscle in pacu (Piaractus mesopotamicus) during growth. Juvenile (n=5) and adult (n=5) fishes were anaesthetized, sacrificed and the weight (g) and the total length (cm) were determined. White muscle samples from dorsal region of each sample, in each growth phase, were collected and and immersed in n- Hexane cooled in liquid nitrogen. Transverse sections (10 µm thick), obtained in a cryostat, were stained with Haematoxilin-Eosin to morphological and morphometric analysis. We calculated the smallest diameter from 100 white muscle fibres per animal in each group. White muscle fibers were grouped in three classes: <20, 20-50 and >50 µm to evaluate hypertrophy and hyperplasia in pacu white skeletal muscle. MyoD gene expression was determined by using RT-PCR. All PCR products visualized in 1% agarose gels were cloned and sequenced. Juvenile and adult pacu fish skeletal muscle showed similar morphology, with mosaic pattern characterized by fibers with different diameters. The great number of muscle fibers with diameter inferior 20 µm observed in juvenile fish confirms the active hyperplasic process. In adult fish, most fibers were over 50 µm diameter and denote the more intense muscle fiber hypertrophy. MyoD mRNA level in the juvenile fish was higher compared to adult fish. A consensus partial sequence for MyoD gene (338 bases pairs) was obtained. This sequence showed similarity with various vertebrate species, including teleost fishes. Differential expression of MyoD gene observed in white muscle of pacu possibly is related to differences in growth patterns during the phases analysed, with predominance of hyperplasia in juveniles and hypertrophy in adult fish
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Expressão do fator de regulação miogenica MyoD, na musculatura estriada esqueletica do pacu (Piaractus mesopotamicus), durante o crescimento
Fernanda Losi Alves de Almeida
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Fernanda Losi Alves de Almeida
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