Resumo: O Helicobacter pylori é uma bactéria gram-negativa que está estritamente relacionada com o desenvolvimento de doenças gástricas, inclusive malignas, sendo classificada como carcinógeno do grupo I pela Agência Internacional para Pesquisa do Câncer. Apesar de grande parte da população mundial estar contaminada pela bactéria, a maioria dos indivíduos permanece assintomática. Muitas abordagens são sugeridas para diferenciar os isolados de H. pylori e diversas técnicas de biologia molecular têm sido aplicadas para caracterizar as amostras clínicas de diferentes pacientes. A análise de restrição (RFLP) usada em conjunto com a PCR tem sido amplamente utilizada para a tipagem de isolados clínicos, utilizando vários genes do genoma do H. pylori como alvos para esse método. Padrões de eletroforese da nested PCR e da PCR para as regiões dos genes urease C e urease B do H. pylori foram obtidos com enzimas de restrição e comparados entre pacientes com úlcera péptica e gastrite crônica. Os produtos da nested PCR para urease C foram digeridos com a enzima Mbo I e os produtos da PCR para urease B com a enzima Hae III, sendo os fragmentos obtidos analisados por eletroforese em gel de agarose. Foram encontrados 7 padrões de genotipagem para urease B e 17 padrões para urease C. O grupo prevalente para gastrite crônica obtido com essa última genotipagem foi o denominado grupo ureC MboI G, com fragmentos de 110, 120, 250 e 310 pares de bases, ocorrendo em 13 pacientes (15,7% dos casos). Em relação aos casos de úlcera péptica, o grupo de genotipagem mais prevalente foi o denominado ureC MboI E, com 110, 180 e 500 pares de bases, ocorrendo em 11 pacientes (24,4% do total de casos). O grupo prevalente obtido com a genotipagem para urease B foi o denominado ureB I, com um fragmento único de 750 pares de bases. Esse grupo foi o prevalente tanto para os casos de úlcera péptica (27), com 60,0%, quanto para os de gastrite crônica (53), com 63,9%. Não foram observadas diferenças significativas entre os padrões encontrados para ambas as doenças. A nested PCR para detecção prévia do DNA do H. pylori também foi realizada, obtendo-se 100% de concordância. Os métodos de tipagem dos produtos obtidos por nested PCR e PCR proporcionam um esquema funcional e de grande reprodutibilidade para estudos epidemiológicos e de caracterização de cepas Ver menos

Abstract: Helicobacter pylori is a gram-negative bacterium that has been implicated as a major human gastric pathogen responsible for gastritis and peptic ulcer disease. It has been classified as a group I carcinogen by the International Agency for Research on Cancer and is regarded as a primary factor for gastric cancer. A significant proportion of the world population is infected with H. pylori, even though most infections are asymptomatic. To isolate H. pylori, many approaches have been presented and several molecular techniques have been applied to separate clinical isolates from different patients. PCR-RFLP analysis has been widely developed for the typing of clinical isolates, with several genes within H. pylori having been targeted by this method. Eletroforesis patterns of nested PCR and PCR to urease C and urease B gene regions of H. pylori were obtained by restriction fragment length polymorphism and compared among patients with peptic ulcer and chronic gastritis. Nested PCR products for urease C were digested with MboI enzyme and PCR products for urease B with Hae III enzyme, and the obtained fragments were analyzed by eletroforesis in agarosis gel. We have encountered 7 genotyping patterns for urease B and 17 patterns for urease C. The prevalent group for chronic gastritis which was obtained with this last genotyping was named ureC MboI G group, with fragments of 110, 120, 250 and 310 base pairs, occurring in 13 patients (15,7% of the cases). Regarding the peptic ulcer cases, the most prevalent genotyping group was named ureC MboI E group, with 110, 180 and 500 base pairs, occurring in 11 patients (24,4% of the cases). The prevalent group obtained with the genotyping for urease B was named ureB I, with only one fragment of 750 base pairs. This group was the prevalent one both in peptic ulcer cases (27) with 60,0%, and in chronic gastritis case (53), with 63,9%. We haven¿t found meaningful differences among the encountered patterns for both diseases. Nested PCR for previous detection of H. pylori DNA has also been performed, and we have obtained 100% of concordance. The typing methods of the products obtained by nested PCR and PCR show a functional scheme and of great reproduction for epidemiologic studies and of H. pylori strains characterization Ver menos