Efeito 'in vitro' da adição do levonorgestrel sobre a concentração intracelular de calcio em espermatozoides de homens ferteis
Luciana Helena de Santis
DISSERTAÇÃO
Português
(Broch.)
T/UNICAMP Sa59e
Campinas, SP : [s.n.], 2006.
49f.
Orientadores: Luis Antonio Violin Dias Pereira, Luis Guillermo Bahamondes
Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia
Resumo: O espermatozóide é uma célula altamente especializada, uma vez que apresenta diferenciações morfofisiológicas que garantem o sucesso da fecundação. Com o objetivo de adquirir a capacidade de fecundação precisam passar por três processos seqüenciais, maturação epididimária, capacitação e...
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Resumo: O espermatozóide é uma célula altamente especializada, uma vez que apresenta diferenciações morfofisiológicas que garantem o sucesso da fecundação. Com o objetivo de adquirir a capacidade de fecundação precisam passar por três processos seqüenciais, maturação epididimária, capacitação e reação acrossômica (RA). A capacitação é um processo que acontece no trato reprodutor feminino e define-se como uma mudança bioquímica na membrana plasmática do espermatozóide, sendo a presença de progesterona e o aumento na concentração intracelular do cálcio ('Ca POT +2¿) eventos característicos e obrigatórios para a posterior RA. O levonogestrel (LNG) é um progestágeno sintético, semelhante a progesterona, o qual tem sido usado como contraceptivo feminino, seja na contracepção de emergência (CE), nas pílulas contraceptivas combinadas ou com o dispositivo intra-uterino (DIU). Entretanto, na literatura não há dados que relacionem a eficácia contraceptiva do lenovogestrel com possíveis efeitos deste hormônio sobre os espermatozóides humanos. Assim, com o objetivo de adicionar dados a respeito do mecanismo de ação contraceptiva do LNG, este estudo teve como objetivo avaliar o efeito de 5 concentrações de LNG, comparáveis as concentrações encontradas no plasma sanguíneo de mulheres, após a ingestão de LNG sob a forma de (CE) com a concentração intracelular do cálcio em espermatozóides capacitados de homens férteis. Um total de 24 amostras de sêmen, provenientes de 4 homens férteis foram avaliadas. Os espermatozóides foram selecionados através de um gradiente de Percoll, e foram submetidas a um período de capacitação. Às amostras foi adicionado o corante Fura2/AM e a seguir estas foram expostas às concentrações de 8, 10, 14, 1.000 e 10.000 ng/mL de LNG e a dois controles, um positivo e outro negativo, sendo respectivamente a progesterona (32 'mu' M = 11.000 ng/mL) e a meio de cultivo human tubal fluid (HTF). A seguir as amostras foram avaliadas através da espectrofotometria de fluorescência, com exitação de 340 nm e emissão de 510 nm. A taxa de fluorescência foi convertida em medidas de concentração intracelular de cálcio ([('Ca POT 2+¿]i), utilizando a equação de Grynkiewicz et al. (1985), a qual demonstrou que as concentrações de 8, 10, 14 e 1.000 ng/mL de LNG foram capazes de induzir um aumento na [('Ca POT 2+¿]i significativamente maior quando comparados ao obtido com HTF, e significativamente menor que ao obtido com progesterona (o indutor natural), excetuando-se a concentração de 10.000 ng/ml (32 'mu' M) de LNG, a qual foi estatisticamente similar que a progesterona 11.000 ng/ml (32 'mu' M). Assim, é possível sugerir que o LNG in vitro, em baixas concentrações, aumente a [('Ca POT 2+¿]i nos espermatozóides. No entanto, este mecanismo, de maneira isolada, não deva ser o responsável pela indução da RA. Entretanto a [('Ca POT 2+¿]i obtida através de altas concentrações de LNG (10.000 ng/ml) pode ser sim, um possível mecanismo de ação do LNG como droga contraceptiva
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Abstract: The spermatozoa is a highly specialized cell because it contains morfophysiological modifications that guarantees fecundation success. Spermatozoa must undergo three sequential changes before they acquire their fertilizing capacity: maturation in epididymis, capacitation and acrosome...
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Abstract: The spermatozoa is a highly specialized cell because it contains morfophysiological modifications that guarantees fecundation success. Spermatozoa must undergo three sequential changes before they acquire their fertilizing capacity: maturation in epididymis, capacitation and acrosome reaction (RA). Capacitation is a process that takes place in the female reproductive tract and is defined as a biochemical modification on the spermatozoa plasmatic membrane. The presence of progesterone (P) and the intracellular calcium concentration increase inside the spermatozoa are typical and obligatory events in the capacitation stage for further RA. Levonogestrel (LNG) is a synthetic progestin, similar to P, which has being used as a female contraceptive in several manners, among them they are: emergency contraception (EC), contraceptive pills combine and with the intrauterine system (IUS). Nevertheless, there are no available data or the scientific literature that correlate LNG contraceptive efficacy with possible effects of the hormones over human spermatozoa. Therefore, to add data over the contraceptive action mechanism of LNG, the aim of this study was to evaluate the effect of 5 concentrations of LNG somes comparable to the levels found in serum following ingestion of LNG as EC on the calcium intracellular concentration (['Ca POT 2+¿]i) rates of capacitated spermatozoa of fertile men. A total of 24 semen samples from 4 fertile men were evaluated. The spermatozoa were selected by Percoll gradient, following incubation with human tubal fluid medium supplemented with bovine serum albumin (HTF/BSA) under capacitating conditions. The sperm suspensions were incubated with Fura2/AM Subsequently the cells were exposed to the following concentration of LNG: 8, 10, 14, 1,000 and 10,000 ng/mL, and two controls (positive and negative). The positive control was P (32 'mu' M=11,000 ng/ml) and the negative one was medium (HTF). Cells were transferred to a quartz cuvette to make the reading in the spectrofluorometer at 340 nm excitation with emission at 510nm. Fluorescence measurements were converted to ['Ca POT 2+¿]i by the equation of Grynkiewicz et al. (1985). The Grynkiewicz equation shown that LNG concentration of 8, 10, 14, and 1,000 ng/mL were able to induce increase in the ['Ca POT 2+¿]i with significantly higher values, when compared with the rate obtained with HTF medium ( as a negative control), and significantly lower than the rate obtained with natural P (as a positive control). However, the exception was the LNG concentration of 10,000 ng/mL (32 'mu' M) in which values of ['Ca POT 2+¿]i were similar to those observed with P at a concentration of 11,000 ng/mL (32 'mu' M). In conclusion, it is possible to suggest that although LNG in vitro, in low concentration, increase the ['Ca POT 2+¿]i in the spermatozoids. Despite the fact that this mechanism is not the only responsible for the RA induction the calcium obtained through high concentration of LNG (10,000 ng/ml) might have a contraceptive action in the spermatozoa
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Pereira, Luis Antonio Violin Dias, 1968-
Orientador
Bahamondes, Luis Guillermo, 1946-
Coorientador
Donato, Jose Luiz
Avaliador
Fazano, Francisco Antonio Techiatti
Avaliador
Efeito 'in vitro' da adição do levonorgestrel sobre a concentração intracelular de calcio em espermatozoides de homens ferteis
Luciana Helena de Santis
Efeito 'in vitro' da adição do levonorgestrel sobre a concentração intracelular de calcio em espermatozoides de homens ferteis
Luciana Helena de Santis
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