Orientador : Antonio Carlos Boschero

Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia

Resumo: O presente trabalho teve como objetivo comparar os efeitos da glicose sobre a secreção de insulina e os fluxos de CA 2+, em ilhotas de ratos recém-isoladas ou mantidas em cultura. Para isto, ilhotas de ratos Wistar adultas foram isoladas por digestão com colagenase. Parte destas ilhotas foi...

Resumo: O presente trabalho teve como objetivo comparar os efeitos da glicose sobre a secreção de insulina e os fluxos de CA 2+, em ilhotas de ratos recém-isoladas ou mantidas em cultura. Para isto, ilhotas de ratos Wistar adultas foram isoladas por digestão com colagenase. Parte destas ilhotas foi mantida em cultura por 5 a 7 dias, numa mistura dos meios BME e DMEM, na proporção de 5/2 (v/v), Acrescida de 10% (v/v) de soro de boi recém-nascido, com concentração final de glicose de 10,5 nM. As ilhotas foram mantidas a 37°C, em atmosfera com 5% de CO2. O meio de cultura foi renovado a cada 48 horas. Imediatamente após o isolamento ou o cultivo, as ilhotas foram levadas 2 vezes com tampão bicarbonato. Para a execução dos protocolos, dois métodos foram utilizados: (a) Perfusão de ilhotas recém-isoladas ou cultivadas, para análise da dinâmica do efluxo do 45 CA e da secreção de insulina; (b) Incubação de células isoladas, provenientes de ilhotas frescas ou cultivadas, para medida da concentração itoplasmática de CA 2+, utilizando-se o Fura 2 como marcador do CA 2+. Os resultados mostraram que: 1. A capacidade da glicose em promover a secreção de insulina foi severamente reduzida nas ilhotas cultivadas. 2. Na ausência do CA2+ extracelular, a glicose provocou uma marcante redução no efluxo do 45CA, tanto em ilhotas recém-isoladas quanto em ilhotas cultivadas. ...Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital

Abstract: The present study aimed at comparing the effects of glucose on ionic and secretoty events in freshly isolated and cultured rat pancreatic islets. For this pourpose islets from female adult fed Wistar rats were isolated by collagenase digestion. Part of these islets were cultured for 5 to 7...

Abstract: The present study aimed at comparing the effects of glucose on ionic and secretoty events in freshly isolated and cultured rat pancreatic islets. For this pourpose islets from female adult fed Wistar rats were isolated by collagenase digestion. Part of these islets were cultured for 5 to 7 days in a mixture of BME basal medium and Dulbecco's modified medium used in a 5/2 volumetric ratio, and supplemented with 10% newborn calf serum to yield a final concentration of glucose close to 10.5 mM. The culture medium was renewed every 48 hours. The islets were maintained at 37ºC in a 5% C2 atmosphere. Immediately before the experiments, the freshly isolated or cultured islets were washed twice with a bicarbonate-buffered solution. The methods used were: (a) Perifusion of freshly isolated or cultured islets to measure the 45CA outflow and insulin release; (b) Incubation of isolated cells, obtained from freshly or cultured islets, to measure the citosolic CA 2+ concentration, using the Fura 2 as an intracellular CA 2+ indicator. The results show that: 1. The capacity of glucose to provoke insulin release was severely reduced in islets maintained in culture. 2. Wheter in freshly in isolated or cultured islets, glucose provoked a marked and sustained decrease in 45CA out-flow from islets deprived of extracellular CA 2+. ...Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations