Orientadores : Edson Rosa Pimentel, Laurecir Gomes

Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia

Resumo: Este trabalho teve como objetivo a identificaçao de PGs e proteinas não colagênicas de cartilagem xifóide de frango. Extrações com MgCl2 e GuCl em diferentes concentrações e tempos, eletroforese em gel de poloacrilamida e agarose, cromatografia de troca iônica e digestões enzimáticas,...

Resumo: Este trabalho teve como objetivo a identificaçao de PGs e proteinas não colagênicas de cartilagem xifóide de frango. Extrações com MgCl2 e GuCl em diferentes concentrações e tempos, eletroforese em gel de poloacrilamida e agarose, cromatografia de troca iônica e digestões enzimáticas, constituiram a metodologia utilizada. As extrações realizadas com MgC12 e GuCl em concentrações que variaram de 1M a 5M apontaram um rendimento maxlmo de ácido urônico quando empregado o MgC12 3M, indicando que estas condiç:ões são mais propícias para a remoção dos proteoglicanos. o melhor tempo de extração observado tanto para GuCl 3M quanto para MgC12 3M foi o de 48 horas. As análises dos extratos feitas após eletroforese em gel de poliacrilamida, indicaram ser a extração pelo MgCl2 um procedimento alternativo ao uso de GuC I , na extração de proteoglicanos e proteínas não colagênicas da matriz extracelular. o emprego de cromatografia de troca iônica indicou que embora eficiente na extração de PGs e proteínas não colagênicas, o MgC12 exibe um menor efeito dissociativo quando comparado ao GuCl. Uma maior remoção de PGs observada após análise dos extratos obtidos por MgC12 em gel de agarose, reforç:a os resultados obtidos nas dosagens de ácido urônÍco. Após digestão com papalna, todos os extratos apresentaram mobilidade similar ao CS padrão. O emprego de condroitinase ABC e posterior análise em gel de agarose, indicou apresença de CS como único glicos.ami"'à_ 1 icano obtido em cartilagem xifóide de frango com dois meses de idade

Abstract: This research was unded ak en to identific proteogl cans <PGs) and ncollagenous proteins of chicken xiphoid cartilage as well as the behaviour of these components in different extraction procedures. Extractions with MgCI2 and GuCl in different concentrations and periods of time,...

Abstract: This research was unded ak en to identific proteogl cans <PGs) and ncollagenous proteins of chicken xiphoid cartilage as well as the behaviour of these components in different extraction procedures. Extractions with MgCI2 and GuCl in different concentrations and periods of time, electrophoresis 1n pol_acrilam_de and agarose gels, ion exchange chromatograph_ and en2_matic dige_tions were the methods employed to evaluate of phisico-chemical phenomena in matrix compounds. The use of extractions with MgC12 and GuCl at concentrations of 1-5M showed a ver_ high _ieId of uron1.c acid when 3M MgCI2 was used. MgCI2 was found to be the most effective extractant at this ion strength, suggesting that the chemical nature of the solvent, pla_s an important role in the extractabilit_ of the PGs an noncollagenous proteins of chicken xiphoid cartilage. Extraction of cartilage PGs whith MgC12 and GuCI exhibited an optimal efficienc_ when performed for 48 hours. Anal_ses of the extracts b_ SDS-pol_acr_lamide geI electrophoresis pointed out that the extraction with MgC12 is an aIternative assa_ to remove noncollagenous proteins of extracellular matrix. Ion-exchange chromatograph_ suggests that MgC12 can be used as an efficient solvent to remove PGs and noncollagenous roteins. However, its application demonstrates a poor dissoclation capaclt_ when compared to GuCl. Agarose gel electrophoresis anal_sis showed ahigher extraction of PGs with MgCI2' which reinforces results obtained with the uronic acid reaction. AlI extracts showed similar chondroitin-sulfate (CS) mobiI it a ft er papaln proteol_sis. Anal_sis of the GAGs released from Chase ABC b_ agarose pol_acr_lamide gel electrophoresis, indicated CS as the onl_ pol_dispersed component extracted ln the chicken xiphoid cartiIage with two months old