Orientador : Yoko Bomura Rosato

Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia

Resumo: Bacillus thuringiensis subsp. Israelensis é uma bactéria entomopatogênica que produz cristais protéicos durante o processo de esporulação. Com o objetivo de se determinar a atividade biológica das proteínas constituintes do cristal foi feita a clonagem molecular dos genes da toxina. A...

Resumo: Bacillus thuringiensis subsp. Israelensis é uma bactéria entomopatogênica que produz cristais protéicos durante o processo de esporulação. Com o objetivo de se determinar a atividade biológica das proteínas constituintes do cristal foi feita a clonagem molecular dos genes da toxina. A estratégia de clonagem consistiu-se na inserção de fragmentos de DNA plasmidial de B. thuringiensis subsp israelensis no plasmídio pUC8, resultando em plasmídios híbridos. Foram obtidos 8 clones recombinantes com atividade contra larvas de ª fluviatilis e hemolíticos para eritrócitos de carneiros e um clone recombinante com atividade larvicida e não hemolítico. Após análise imunológica com anticorpos produzidos contra as principais frações protéicas de B. thuringiensis subsp israelensis, verificou-se a produção dos peptídeos de 28, 33 e 38 kD nos clones recombinantes larvicidas e hemolíticos e a ausência do peptídeo de 33 kD no clone não hemolítico

Abstract: Bacillus thuringiensis subsp. Isralensis is a bacteria entomopathogenic that produce proteins crystals during the process of sporulation. The molecular cloning of the toxin genes was carried out to determine the biological activities of the crystal proteins. Fragments of DNA plasmids of...

Abstract: Bacillus thuringiensis subsp. Isralensis is a bacteria entomopathogenic that produce proteins crystals during the process of sporulation. The molecular cloning of the toxin genes was carried out to determine the biological activities of the crystal proteins. Fragments of DNA plasmids of Bacillus thuringiensis subsp. Israelensis coli were inserted in the vector pUC8 and cells of Escherichia coli were transformed with the hybrid plasmids. Eight of the recombinants obtained were active against larvae of A.fluviatilis and hemolytic for sheep red blood cells, while one of the recombinants showed larvicidal activity but did not show hemolytic activity. Antibodies were produced against the major proteins of Bacillus thuringiensis subsp. israelensis crystal and the immunodection test showed the presence of three types of proteins with 28, 33 and 38 kD, respectively. While the clones with IarvicidaI and hemolytic activity contained all three types of proteins, the one with no hemolytic activity lacked the 33 kD protein